[发明专利]一种基于GQDs的共振光散射探针结合CHA技术定量检测突变DNA的方法

摘要

本发明公开了一种基于GQDs的共振光检测探针结合CHA技术定量检测突变DNA的方法。本发明首先合成石墨烯量子点，接着针对目标物设计了两种发夹探针H1、H2，然后将探针与GQDs通过缩合反应制备两种探针GQDs‑H1,GQDs‑H2。在PBS缓冲溶液反应体系中，当加入p53突变DNA时，会引起GQDs‑H1和GQDs‑H2的聚集，产生显著增强的共振光信号，实现对p53突变DNA的定量检测。本发明具有很高的灵敏度和选择性，线性范围为1pM到50nM，检测限为0.8pM，能有效地定量检测目标物。

主权项

1.一种基于GQDs的共振光散射探针结合CHA技术定量检测突变DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)石墨烯量子点的制备将2g柠檬酸置于圆底烧瓶中，在200℃下用加热套加热30分钟，柠檬酸逐渐溶化,其颜色从无色变为橙色。然后，在剧烈搅拌下将100mL 10mg mL^‑1NaOH溶液逐滴加入到反应混合物,并搅拌30分钟，得到的GQDs溶液调节至中性并储存在冰箱中。(二)一种发夹型DNA探针的设计，具有：茎环结构H1：NH₂C₆‑GAC TCC GGT TCA TGC ATA TAG GAG TCC GAG CAT GAA CCG发夹H2：NH₂C₆‑TCA TGC TCG GAC TCC TAT ATG CAT GAA CCG GAG TCC GAG(三)石墨烯量子点和氨基修饰的发夹探针的缀合取10mL的离心管，加入0.1mg mL^‑1的石墨烯量子点溶液，超声15min。然后，再加入50mM EDC和10mM NHS，在室温下搅拌30min，以使石墨烯量子点上的羧基活化。将GQDs溶液分成两份相等的体积。分别加入两份体积相同的氨基修饰的发夹探针H1、H2,在室温下进行缩合反应,持续反应一夜，得到GQDs‑H1,GQDs‑H2缀合物(四)样品的检测步骤一：在PBS缓冲体系中，将GQDs‑H1,GQDs‑H2缀合物溶液与不同浓度的p53突变DNA在37℃下反应1h；步骤二：将溶液置于荧光分光光度计上，激发和发射狭缝宽度设置为3.0nm，以相同的激发和发射波长，在220到700nm的范围内进行共振光散射扫描，通过共振光散射光谱实现对p53突变DNA的定量检测。