[发明专利]一种大肠杆菌工程菌高效表达超螺旋质粒DNA的培养方法

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌工程菌高效表达超螺旋质粒DNA的培养方法，包括如下步骤：（1）液体培养基的配制；（2）固体培养基的配制；（3）培养基灭菌；（4）纯化培养；（5）扩大培养。本发明提供了一种大肠杆菌工程菌高效表达超螺旋质粒DNA的培养方法，培养基中原料搭配合理，培养方法科学，通过本发明的培养方法提高了单位体积大肠杆菌工程菌菌液中质粒总含量，单位菌体质粒含量，单位菌体质粒中超螺旋质粒的含量，对于质粒DNA提取及应用有很好的推动作用，极具市场推广价值。

主权项

1.一种大肠杆菌工程菌高效表达超螺旋质粒DNA的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）液体培养基的配制：a. 原料称取：称取相应重量份的甘油21~23份、胰蛋白胨13~15份、酵母提取物13.5~14.5份、氯化钠12.5~13.5份、微量元素0.62~0.68份、改性复合粉8.5~9.5份、无菌水460~540份备用；b. 培养基的配制：将操作a称取的无菌水注入搅拌罐内，将搅拌罐内的温度升至99~101℃，然后将操作a中称取的甘油、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、微量元素、改性复合粉依次投入搅拌罐内，边搅拌边投入，持续搅拌52~58min，搅拌的同时进行超声波处理；（2）固体培养基的配制：将琼脂粉和步骤（1）所得的液体培养基按照质量体积比为7~8g:900~1000mL共同投入搅拌罐内，将搅拌罐内的温度升至98~100℃，边搅拌边加热，直至琼脂粉完全溶解；（3）培养基灭菌：将步骤（1）所得的液体培养基和步骤（2）所得的固体培养基分别置于高温高压锅内进行灭菌处理，灭菌的温度为120~122℃，灭菌19~23min后，取出培养基，待培养基的温度降至45~55℃时，分别向灭菌处理后的固体培养基和液体培养基中加入培养基体积比1~2%的氨苄青霉素，摇匀即可；（4）纯化培养：将大肠杆菌工程菌以平板划线的方式接种于步骤（3）所得的固体培养基中，将接种后的固体培养基倒平板，然后置于培养箱内进行培养，培养箱内的温度控制为34~36℃，培养直至单菌落的直径为0.7~1.1mm；（5）扩大培养：用无菌的接种针挑取步骤（4）中固体培养基中的单菌落接种于步骤（3）所得的液体培养基中，将接种后的液体培养基置于摇床中进行培养，在摇床中培养的同时，每隔30~40min进行一次光波交替处理，直至OD600达到0.9~1.0即可。