[发明专利]LDH-dsRNA纳米化制剂及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201811107557.X | 申请日： | 2018-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN109247328B | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 张德咏;刘勇;孙书娥;张松柏;谭新球;彭静;张卓;王福祥;燕飞;李凡;陶小荣;何自福;缪武 | 申请（专利权）人： | 湖南省植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113 |
| 代理公司： | 43008 湖南兆弘专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 陈晖 |
| 地址： | 410125 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种LDH‑dsRNA纳米化制剂及其制备方法和应用，LDH‑dsRNA纳米化制剂包括层状双氢氧化物和dsRNA，TMV dsRNA吸附在层状双氢氧化物表面，dsRNA的靶标基因为TMV外壳蛋白CP基因。LDH‑dsRNA纳米化制剂制备方法包括：抽提基因组RNA、设计引物、RT‑PCR扩增、dsRNA合成、dsRNA与层状双氢氧化物结合得到LDH‑dsRNA纳米化制剂。本发明的LDH‑dsRNA纳米化制剂具有持效时间长、环境友好型、对作物无药害等优点，可应用于预防和治疗TMV。 | ||
| 搜索关键词： | 纳米化 层状双氢氧化物 制备方法和应用 环境友好型 基因组RNA 设计引物 外壳蛋白 制剂制备 靶标 持效 抽提 吸附 药害 治疗 预防 应用 | ||
【主权项】：
1.一种LDH-dsRNA纳米化制剂在预防和治疗TMV上的应用，其特征在于，所述LDH-dsRNA纳米化制剂包括层状双氢氧化物和dsRNA，所述dsRNA吸附在所述层状双氢氧化物表面；所述dsRNA的靶标基因为TMV外壳蛋白CP基因；所述TMV外壳蛋白CP基因的DNA序列如SEQ IDNO.1所示；所述层状双氢氧化物和dsRNA的质量比为1︰10～100；/n其制备方法包括以下步骤：/nS1、以TMV RNA为模板，根据所述TMV RNA设计含有Hind III和Kpn I的扩增引物，进行RT-PCR扩增得到扩增产物；所述含有Hind III和Kpn I的扩增引物为SEQ ID NO.2所示的DNA序列和SEQ ID NO.3所示的DNA序列；/nS2、将所述扩增产物连接至pEASY-T1载体上得到连接产物，将所述连接产物转化至感受态细胞中得到重组子；/nS3、以所述重组子为模板，设计含有T7启动子序列的引物，进行PCR扩增，得到含有T7启动子的扩增产物；所述含有T7启动子序列的引物为SEQ ID NO.4所示的DNA序列和SEQ IDNO.5所示的DNA序列；/nS4、将所述含有T7启动子的扩增产物作为模板，进行dsRNA的体外合成；/nS5、将层状双氢氧化物溶于DEPC处理水中制备0.01w/v％层状双氢氧化物工作液；将合成的所述dsRNA和所述0.01w/v％层状双氢氧化物工作液振荡混合，使所述dsRNA吸附在层状双氢氧化物的表面得到LDH-dsRNA纳米化制剂；/n所述应用方法为：在烟草为5叶期时，将LDH-dsRNA纳米化制剂喷施烟叶上；所述LDH-dsRNA纳米化制剂的浓度为1v/v％。/n
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