[发明专利]基于类器官方法的患者来源的肝癌正常免疫小鼠移植瘤模型的构建方法及其应用

摘要

基于类器官方法的患者来源的肝癌正常免疫小鼠移植瘤模型的构建方法及其应用，它属于医药领域，本发明的目的是以“类器官”培养技术，采用微载体为支架材料，复合患者来源的肝癌细胞培养出细胞‑3D材料复合体，然后直接将细胞‑3D材料复合体接种于正常免疫小鼠皮下，构建体内患者来源的肝癌移植瘤模型，解决目前人肝癌移植瘤模型存在的采用裸鼠、SCID鼠等免疫缺陷小鼠，不易饲养，价格昂贵，成瘤率不高的问题；尤其是解决免疫缺陷小鼠人肝癌移植瘤模型无法反映机体免疫系统在肿瘤发生、发展过程中所起的重要作用的问题，及免疫缺陷小鼠人移植瘤模型存在成瘤周期长，临床急迫需要药物治疗患者的药敏需求。本发明应用于小鼠模型构建领域。

主权项

1.基于类器官方法的患者来源的肝癌正常免疫小鼠移植瘤模型的构建方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、获取人肝癌肿瘤细胞：取肝癌细胞和肝癌组织间质细胞，以含10％胎牛血清的DMEM、质量百分含量为1％青霉素和质量百分含量为1％链霉素的完全培养液将上述细胞混匀；若台盼蓝计数活细胞数>95％，则调整细胞浓度至2×107/mL，然后放入37℃、5％CO2培养箱；二、将微载体浸泡于体积百分含量为75％的酒精24h后，用1×PBS缓冲液清洗5遍，置于DMEM培养基中孵育24‑48h；将步骤一得到的人原代肝癌细胞悬液与孵育好的微载体混合，在温度为37℃、5％CO2培养箱中培养24‑48h，得到孵育后的细胞‑微载体复合体；三、用1×PBS缓冲液清洗步骤二孵育后的细胞‑微载体复合体4遍，再用1×PBS缓冲液重悬细胞并调整细胞浓度至2×107/mL，调整微载体浓度至200ug～300ug/mL，得细胞‑微载体混悬液，并置于冰上备用；将细胞‑微载体混悬液注射于7‑8周的正常免疫小鼠体内，体内植入20‑30天后，即构建完成患者来源的肝癌移植瘤小鼠模型。