[发明专利]一种复合微生物制品高效表达的方法及其用途

摘要

本发明公开了一种复合微生物制品高效表达的方法，其制备方法包括以下步骤：S1、纳豆制作：取适量纳豆杆菌菌种液体振荡培养，然后放入冰箱冷藏备用，选取颗粒饱满、蛋白质含量高的大豆，用大豆5倍的水量浸泡二十四小时（室温18度），沥水，然后加入5%的食盐和2%蔗糖，于高压锅内（121度）蒸煮30‑45分钟，冷却至50度以下。该复合微生物制品高效表达的方法及其用途，运用微生物发酵工程技术构建高效表达质粒，优化工程菌发酵条件实现纳豆激酶的低成本、高活性、高产量生产，该纳豆激酶粉末的酶活力为400万U/g‑600万U/g，1克大豆可发酵出纳豆激酶2000IU，较市面上传统的生产方法，产量可提高40%‑50%。

主权项

1.一种复合微生物制品高效表达的方法，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：S1、纳豆制作：取适量纳豆杆菌菌种液体振荡培养，然后放入冰箱冷藏备用，选取颗粒饱满、蛋白质含量高的大豆，用大豆5倍的水量浸泡二十四小时（室温18度），沥水，然后加入5%的食盐和2%蔗糖，于高压锅内（121度）蒸煮30‑45分钟，冷却至50度以下，造无菌环境下，将事先培养好的纳豆杆菌菌种液体喷射于大豆中，拌匀，恒温培养发酵二十四小时，得纳豆，将纳豆放入4度冰箱中老化20小时，备用；S2、纳豆激酶制作：种子液培养，种子液配方为2%‑3%葡萄糖、0.3%‑0.4%磷酸氢钠、0.04%‑0.05%硫酸镁、2%‑3%酵母粉、3%‑5%魔芋粉以及0.03%‑0.04%氯化钙，种子液的PH值为7，以200转每分钟的速度振荡5小时，按8%的量接种于上述制得的纳豆中，于35‑37度环境下，发酵24小时，然后用生理盐水浸泡提取、离心，既得纳豆激酶试液；S3、纳豆激酶提取：将纳豆激酶试液通过0.2微米‑0.22微米的中空纤维膜进行澄清，再用孔径为10‑12Kda的中空纤维膜进行超滤浓缩，浓缩倍数为6‑9倍，得浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥后得到纳豆激酶粉末，该纳豆激酶粉末的酶活力为400万U/g‑600万U/g。