[发明专利]一种基于组织培养的玫瑰种质保存方法

摘要

本发明提供了一种基于组织培养的玫瑰种质保存方法，属于园艺植物种质保存技术领域。该方法包括以下步骤：S1、选种与预处理；S2、外植体灭菌与接种；S3、种质保存材料的获取；S4、试管苗干旱应激处理；S5、试管苗限制生长保存；S6、试管苗恢复生长；S7、试管苗生根；S8、驯化移栽。本发明首次建立了基于组织培养的玫瑰种质保存方法，该方法操作简便，稳定可靠，可重复性强，极大节省了土地、人力和物力，通过限制种质保存材料的生长有效地延长了玫瑰种质的保存时间，种质恢复生长后在增殖、生根、移栽各方面表现良好，是一种切实可行的玫瑰种质资源保存方法，为玫瑰的杂交育种以及商业生产奠定了基础。

主权项

1.一种基于组织培养的玫瑰种质保存方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、选种与预处理选择健壮无病的大田栽培的玫瑰植株，移入洁净棚内培养6~8天，以去除杂菌；从植株上剪取当年生的枝条用流动水冲洗干净后，浸入装有5~8mg/L的2,4‑D溶液中，4℃低温预处理2~3天；S2、外植体灭菌与接种将上述枝条用毛刷蘸取洗衣粉水轻轻刷洗后转入超净工作台进行无菌操作，切取带腋芽茎段作为外植体，先用75%乙醇表面灭菌30s，再用0.1%升汞+3滴吐温20灭菌8min，每次灭菌后均用无菌水冲洗4~5次；最后用复合维生素溶液浸泡10min，滤纸吸去多余水分；用解剖刀将灭菌后的外植体两端接触升汞的部位切去，再切割成1~2cm带有1个腋芽的茎段，按其生长方向接种于培养基A中；S3、种质保存材料的获取①避光培养，将接好种的培养瓶置于温度为21±2℃的避光环境中培养，培养时间为12~15天；②光照培养，将经避光培养的培养瓶移入温度为23±2℃培养室进行光照，光照时间10~12h/天，光照强度为1600~20001x，培养时间为3个月左右，将获得的试管苗作为种质保存材料；培养期间每个月对培养室进行消毒处理；S4、试管苗干旱应激处理将步骤S3获得的试管苗置于含有聚乙二醇的液体MS培养基中处理24h，模拟干旱逆境以提高试管苗的抗逆性；S5、试管苗限制生长保存将上述处理后的试管苗分割成具有1‑3株芽苗的小块，转接至培养基B上，并在培养基表面倒入适量的无菌硅油，然后置于低温、弱光的条件下使试管苗缓慢生长，每14个月继代一次，继代次数最多不超过3次； S6、试管苗恢复生长当玫瑰种质需要恢复生长时，将步骤S5中存活的试管苗转接到培养基C上，培养条件控制为温度23±2℃，光照强度2000~2600lx，每天光照12~14h，每培养20~25天继代1次，继代2次；S7、试管苗生根将恢复生长的试管苗切成单株转接到半固体生根培养基中，生根培养基成分为 1/2MS（无琼脂）+0.3mg/L NAA+10g/L甘薯泥+3g/L植物凝胶，pH值为5.8；生根培养条件为温度25±2℃、光照强度2800~3200lx、每天光照12~14h，培养24~30天； S8、驯化移栽将试管苗转移到室外，在自然光照下先不打开瓶盖炼苗3d，再松开瓶口炼苗2天，然后完全打开瓶盖炼苗2d，最后用镊子将试管苗取出，将根部用1000倍50%多菌灵可湿性粉剂稀释液浸泡10~15min，然后移栽入装有栽培基质的穴盘上，正常进行水、肥、药管理；移栽后温度控制在18~30℃，空气相对湿度控制在75~85%。