[发明专利]一种利用放线菌提升植物炭疽菌拮抗作用的方法

摘要

本发明公开了一种利用放线菌提升植物炭疽菌拮抗作用的方法，涉及微生物技术领域，包括以下步骤：A：采集、B：分离、C：筛选、D：复筛、E：统计、F：制备以及G：注射，本发明根据放线菌的抑菌特性，制成能够注入植物体内的抑菌溶液，显著提升了植物炭疽菌拮抗作用，较目前病害防治所用的化学药剂相比，具有高效、低毒、低残留、无污染和不易产生抗药性的特征。本发明制成的抑菌溶液，能够对多种病原菌进行抑制，在被开发为生防菌制剂用于对植物病害的生物防治上，具有良好的市场应用前景。

主权项

1.一种利用放线菌提升植物炭疽菌拮抗作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：A：采集：取一定量的太子参叶斑病病叶和茶炭疽病病叶，以及一定量从太子参及茶叶主产区采集的土壤；B：分离：首先从太子参叶斑病病叶和茶炭疽病病叶分离出炭疽病原菌，然后从太子参及茶叶主产区采集的土壤样品中分离出多株细菌；C：筛选：从多株细菌中筛选出多株具有拮抗炭疽病原菌的细菌菌株，然后通过平板划线法在培养基中将菌株纯化，对纯化后的细菌菌株进行复筛，并在同一个培养皿中做3‑5次重复，得到复筛后的细菌菌株；D：复筛：通过扩增细菌的16‑SrDNA序列，将测序回来的序列经NCBI同源比对后，构建系统进化树，然后将细菌经过革兰氏染色和芽孢染色，再通过全自动微生物分析系统对多种细菌进行生理生化指标测定，将其分为不同的种属，然后通过压片镜检法来筛选出放线菌；E：统计：将含有炭疽病原菌菌落分别放入不同的培养基中(含不同种类的放线菌菌株)，培养4‑6小时后，统计多种细菌菌株对炭疽病原菌的菌丝生长抑制率，得到拮抗效果最好的放线菌菌株，将其命名为菌株A 1103；F：制备：首先将菌株A 1103放入培养基中活化，时间为2‑4天，然后将活化后的菌株A 1103接种到高氏一号液体发酵培养基，取发酵液经由无菌滤纸抽滤，分别获得上清液和菌丝体，取上清液，用乙酸乙酯萃取1‑3次，合并萃取液，得上清液的乙酸乙酯萃取液，菌丝体用60‑80％的丙酮水溶液浸泡，浸泡时间为8‑12小时，然后用超声波破碎提取2‑4次，合并提取液，将提取液减压浓缩至无丙酮后，得到菌株A 1103的粗提取液，G：注射：将所得粗提物以无菌水稀释配制成溶液，注入植物的体内。