[发明专利]稀有突变检测方法、其试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201811119565.6 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN109266723A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 刘永;吴建榕 | 申请（专利权）人： | 北京协和洛克生物技术有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京市英智伟诚知识产权代理事务所(普通合伙) 11521 | 代理人： | 刘丹妮 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种稀有突变检测方法、其试剂盒及应用，所述方法为U‑ARMS方法。本发明所提供的检测方法结合了ARMS及锁核酸(LNA)突变富集和Taqman‑MGB荧光检测技术，利用LNA增强突变碱基识别能力，ARMS引物对突变靶序列进行特异性PCR扩增，Taqman‑MGB探针对扩增产物进行检测，在荧光PCR基础上鉴定特定突变，此种方法与sanger测序、芯片检测、二代测序等突变检测技术比较，本发明用于基因突变检测具有成本低、特异性强、灵敏度极高、操作简单快速等优势。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 稀有突变检测 试剂盒 特异性PCR扩增 基因突变检测 突变检测技术 荧光检测技术 扩增产物 特异性强 突变碱基 芯片检测 荧光PCR 灵敏度 靶序列 锁核酸 检测 测序 富集 应用 | ||
【主权项】：
1.一种稀有突变检测方法，其特征在于，所述方法为U‑ARMS方法，包括以下步骤：(1)根据目的基因突变位点设计ARMS引物，所述ARMS引物的上游引物或下游引物的3′末端为突变位点，进行LNA修饰，并在突变位点识别引物的5′末端延伸一段通用序列；(2)根据所述通用序列设计Taqman‑MGB探针，所述Taqman‑MGB探针特异识别扩增产物的反义链，所述探针的5′末端标记荧光基团，所述探针的3′末端结合有小沟结合分子；(3)根据所述通用序列设计通用引物；(4)提取模板DNA，利用步骤(1)所得ARMS引物、步骤(2)所得Taqman‑MGB探针和步骤(3)所得通用引物对模板DNA进行荧光PCR检测。
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