[发明专利]纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法在审

专利信息
申请号: 201811123839.9 申请日: 2018-09-26
公开(公告)号: CN109306370A 公开(公告)日: 2019-02-05
发明(设计)人: 周超;李彬;金扬湖 申请(专利权)人: 浙江海洋大学
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12Q1/06;G01N27/447;G01N27/42
代理公司: 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 代理人: 吴秉中
地址: 316000 浙江省舟山市普陀海*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明公开了纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法,包括样品提取、细胞存活率测定、体外暴露、DNA损伤的检测,DNA损伤的检测为:将体外暴露得到的沉淀细胞团用PBS或HBSS平衡盐溶液重悬沉淀细胞团,离心,去除上清液得单细胞悬液;将单细胞悬液利用琼脂糖制成胶板;将胶板浸入含有DMF和二甲基甲酰胺的工作液中裂解;将裂解后的胶板置于电泳液中,解旋后电泳;将电泳后的胶板用Tris‑HCl中和;将中和后的胶板染色后在荧光显微镜下观察,拍摄,使用CASP彗星图像分析软件自动分析。本发明检测方法具有简便、快速、低耗、灵敏性和准确性高、重复性好、成本较低等独特优点,所需样本量少。
搜索关键词: 胶板 检测 单细胞悬液 电泳 沉淀细胞 纳米材料 桡足类 裂解 体外 胁迫 中和 二甲基甲酰胺 图像分析软件 细胞存活率 荧光显微镜 浸入 独特优点 样品提取 自动分析 彗星 电泳液 工作液 灵敏性 琼脂糖 上清液 样本量 暴露 染色 去除 重悬 拍摄 观察
【主权项】:
1.纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法,包括样品提取、细胞存活率测定、体外暴露、DNA损伤的检测,其特征在于:所述DNA损伤的检测为:a单细胞悬液制备:将体外暴露得到的沉淀细胞团用PBS或HBSS平衡盐溶液重悬沉淀细胞团,离心,去除上清液得单细胞悬液;b胶板制备:将单细胞悬液利用琼脂糖制成胶板;c裂解:将胶板浸入含有DMF和二甲基甲酰胺的工作液中裂解;d电泳:将裂解后的胶板置于电泳液中,解旋后电泳;e中和:将电泳后的胶板用Tris‑HCl中和;f观察计数和数据分析:将中和后的胶板染色后在荧光显微镜下观察,拍摄,使用CASP彗星图像分析软件自动分析。
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