[发明专利]纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法在审
申请号: | 201811123839.9 | 申请日: | 2018-09-26 |
公开(公告)号: | CN109306370A | 公开(公告)日: | 2019-02-05 |
发明(设计)人: | 周超;李彬;金扬湖 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/06;G01N27/447;G01N27/42 |
代理公司: | 杭州浙科专利事务所(普通合伙) 33213 | 代理人: | 吴秉中 |
地址: | 316000 浙江省舟山市普陀海*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明公开了纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法,包括样品提取、细胞存活率测定、体外暴露、DNA损伤的检测,DNA损伤的检测为:将体外暴露得到的沉淀细胞团用PBS或HBSS平衡盐溶液重悬沉淀细胞团,离心,去除上清液得单细胞悬液;将单细胞悬液利用琼脂糖制成胶板;将胶板浸入含有DMF和二甲基甲酰胺的工作液中裂解;将裂解后的胶板置于电泳液中,解旋后电泳;将电泳后的胶板用Tris‑HCl中和;将中和后的胶板染色后在荧光显微镜下观察,拍摄,使用CASP彗星图像分析软件自动分析。本发明检测方法具有简便、快速、低耗、灵敏性和准确性高、重复性好、成本较低等独特优点,所需样本量少。 | ||
搜索关键词: | 胶板 检测 单细胞悬液 电泳 沉淀细胞 纳米材料 桡足类 裂解 体外 胁迫 中和 二甲基甲酰胺 图像分析软件 细胞存活率 荧光显微镜 浸入 独特优点 样品提取 自动分析 彗星 电泳液 工作液 灵敏性 琼脂糖 上清液 样本量 暴露 染色 去除 重悬 拍摄 观察 | ||
【主权项】:
1.纳米材料胁迫下桡足类DNA损伤的检测方法,包括样品提取、细胞存活率测定、体外暴露、DNA损伤的检测,其特征在于:所述DNA损伤的检测为:a单细胞悬液制备:将体外暴露得到的沉淀细胞团用PBS或HBSS平衡盐溶液重悬沉淀细胞团,离心,去除上清液得单细胞悬液;b胶板制备:将单细胞悬液利用琼脂糖制成胶板;c裂解:将胶板浸入含有DMF和二甲基甲酰胺的工作液中裂解;d电泳:将裂解后的胶板置于电泳液中,解旋后电泳;e中和:将电泳后的胶板用Tris‑HCl中和;f观察计数和数据分析:将中和后的胶板染色后在荧光显微镜下观察,拍摄,使用CASP彗星图像分析软件自动分析。
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