[发明专利]一种同时检测12种致病细菌的实时荧光定量PCR的方法在审
| 申请号： | 201811130713.4 | 申请日： | 2018-09-27 |
| 公开（公告）号： | CN109182567A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 牛超;刘颖;曹洋;王涛;董庆洋;李君文 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/06;C12R1/19;C12R1/42;C12R1/63;C12R1/46;C12R1/37;C12R1/445;C12R1/01 |
| 代理公司： | 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(特殊普通合伙) 33243 | 代理人： | 洪珊珊 |
| 地址： | 300050*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明提供一种同时检测12种致病细菌的实时荧光定量PCR的方法：收集目标致病菌特异性致病基因或毒素基因，以此为靶基因设计引物和探针，使反应条件一致；提取待检测样品基因组模板；将模板分别加入装有不同特异上下游引物和探针的小管中，再加入相应的荧光定量PCR试剂；在同一轮荧光定量PCR循环下，使相应引物和探针在各自的反应管内对样品同时、快速和定量检测。更加简便、快速、高效、经济的可同时检测饮水和食品中12种常见致病细菌（大肠杆菌O157：H7、单核增生李斯特菌、沙门氏菌、副溶血性弧菌、乙型溶血性链球菌、小肠结肠耶尔森氏菌、粪链球菌、志贺氏菌、奇异变形杆菌、河流弧菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌）。 | ||
| 搜索关键词： | 致病细菌 探针 实时荧光定量PCR 引物 检测 沙门氏菌 单核增生李斯特菌 乙型溶血性链球菌 荧光定量PCR试剂 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌O157 副溶血性弧菌 奇异变形杆菌 致病菌 荧光定量PCR 待检测样品 基因组模板 空肠弯曲菌 耶尔森氏菌 定量检测 毒素基因 反应条件 粪链球菌 河流弧菌 设计引物 小肠结肠 志贺氏菌 致病基因 靶基因 反应管 小管 饮水 | ||
【主权项】：
1.一种同时检测12种致病细菌的实时荧光定量PCR的方法，具体步骤包括：1）12种致病细菌靶基因的选择收集及生物信息学分析；2）高通量荧光定量PCR引物探针的设计；3）12种致病菌基因组提取，设计的引物、探针对12种致病菌特异性验证；4）构建DNA标准品，制作标准曲线，根据标准曲线测定检测灵敏度； 5）12种致病菌最低检测限的测定。
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