[发明专利]敲除载体、打靶载体、肝脏细胞中的PPARG基因的体外敲除方法以及敲除肝脏细胞

摘要

本发明公开了一种敲除载体，包括CRISPR/Cas9载体骨架和连接到CRISPR/Cas9载体骨架上的一段互补DNA序列；CRISPR/Cas9载体骨架能够表达Cas9核酸酶；互补DNA序列能够被对应地转录为特异性识别PPARG基因中的特定序列的sgRNA，sgRNA能够与PPARG基因中对应的特定序列的互补链互补配对，使Cas9酶特异地切割特定序列，特定序列包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6中的一种或多种。本发明还公开了一种打靶载体，包括依次连接的5’同源基因、标记基因及3’同源基因，5’同源基因和3’同源基因分别与肝脏细胞中含有PPARG基因的染色体上的PPARG基因的切割位点的上游端相邻基因和下游端相邻基因的序列同源。本发明还公开一种肝脏细胞中的PPARG基因的体外敲除方法和一种PPARG基因敲除肝脏细胞。

主权项

1.一种敲除载体，其特征在于，所述敲除载体包括CRISPR/Cas9载体骨架和连接到所述CRISPR/Cas9载体骨架上的一段互补DNA序列；所述CRISPR/Cas9载体骨架能够表达Cas9核酸酶；所述互补DNA序列能够被对应地转录为特异性识别PPARG基因中的特定序列的sgRNA，所述sgRNA能够与所述PPARG基因中所述特定序列的互补链互补配对，使所述Cas9酶特异地切割所述特定序列，所述特定序列包括如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5及SEQ ID NO.6中的一种或多种。