[发明专利]一种检测牛布鲁氏菌HSP70的间接ELISA的建立方法在审
| 申请号： | 201811141012.0 | 申请日： | 2018-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN109490541A | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 吴同垒;于秀剑;庞洪泽;李巧玲;杜万年;肖丽荣;张志强;史秋梅 | 申请（专利权）人： | 河北科技师范学院 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 066004 河北省*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种检测牛布鲁氏菌HSP70的间接ELISA的建立方法，具体步骤如下：制备牛布鲁氏菌HSP70的融合蛋白，并对蛋白进行纯化，获得纯化的蛋白；以获得的纯化的蛋白为抗原检测布鲁氏菌血清样本，同时确定抗原包被浓度、血清稀释度、封闭液种类、二抗稀释浓度以及显色时间；确定间接ELISA的临界值；间接ELISA结果判定标准；分析间接ELISA方法的敏感性和特异性。本发明具体通过对HSP70进行原核表达，获得纯化的蛋白，以纯化蛋白作为抗原，建立检测牛布鲁氏菌间接ELISA的方法，为布鲁氏菌病的血清学检测提供重要方法。 | ||
| 搜索关键词： | 间接ELISA 布鲁氏菌 蛋白 种检测 结果判定标准 布鲁氏菌病 血清稀释度 血清学检测 纯化蛋白 抗原包被 抗原检测 融合蛋白 血清样本 原核表达 封闭液 抗原 二抗 稀释 显色 制备 检测 分析 | ||
【主权项】：
1.一种检测牛布鲁氏菌HSP70的间接ELISA的建立方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)制备牛布鲁氏菌HSP70融合蛋白，并对蛋白进行纯化，获得纯化的蛋白；(2)以步骤(1)获得的纯化的蛋白为抗原检测布鲁氏菌血清样本，同时确定抗原包被浓度、血清稀释度、封闭液种类、二抗稀释浓度以及显色时间；(3)确定间接ELISA的临界值：临界值＝平均值+2.58×标准差；平均值为阴性血清间接ELISA结果的平均值，标准差为阴性血清间接ELISA结果的标准差；间接ELISA结果判定标准：布鲁氏菌血清样本的OD值大于等于临界值判断为阳性，布鲁氏菌血清样本的OD值小于临界值判断为阴性；(4)分析间接ELISA方法的敏感性和特异性。
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