[发明专利]一种利用结构特异性核酸内切酶的基因克隆方法在审
| 申请号： | 201811142224.0 | 申请日： | 2018-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN109234296A | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 袁慧;田文奇 | 申请（专利权）人： | 苏州博睐恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215300 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用结构特异性核酸内切酶的基因克隆方法，利用结构特异性核酸内切酶Fen1，将载体与目标基因之间杂交退火形成的带flap结构的重组DNA分子的flap链切除，形成带缺口的DNA重组质粒，转化大肠杆菌后修复缺口形成完好的环状重组DNA分子，进行DNA克隆。通过上述方式，本发明的方法能够提高显著提高目标基因与载体间的重组效率，而且只需要一对载体与目标基因的PCR片段，大大方便了操作，提高了克隆效率，能应用于重组DNA的构建（基因克隆）、DNA定点突变等，也可用于需要进行DNA文库构建的精准医疗等领域。 | ||
| 搜索关键词： | 特异性核酸 基因克隆 目标基因 内切酶 重组DNA分子 构建 退火 大肠杆菌 定点突变 重组DNA 可用 质粒 切除 克隆 杂交 修复 转化 医疗 应用 | ||
【主权项】：
1.一种利用结构特异性核酸内切酶的基因克隆方法，其特征在于，包括步骤为：（1）利用引物扩增载体和目标基因，使所述载体和所述目标基因的两端产生同源区域；（2）将步骤（1）得到的所述载体和所述目标基因混合并杂交配对连接，产生flap 结构，得到带flap 结构的重组DNA分子；（3）将步骤（2）得到的带flap 结构的重组DNA分子用结构特异性核酸内切酶Fen1切除，得到含目标基因的带缺口的重组载体；（4）步骤（3）得到的含目标基因的带缺口的重组载体转化大肠杆菌后，所述含有目标基因的重组DNA的缺口被修复好，得到含目标基因的完整重组载体。
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