[发明专利]小鼠胎肝基质细胞构建方法及其在造血辅助中的应用

摘要

本发明公开了一种小鼠胎肝基质细胞构建方法及其在造血辅助中的应用。通过胎肝基质细胞获取及体外培养，骨髓LK细胞分离和细胞骨髓腔内移植的操作步骤完成。本发明制备的胎肝基质细胞在造血重建的早期能促进PLT和RBC的恢复，促进HSC的增殖和快速扩增，这对HSC移植中改善宿主的造血微环境，提升造血重建效率有重要意义。

主权项

1.一种小鼠胎肝基质细胞构建方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)胎肝基质细胞获取及体外培养颈椎脱臼处死孕鼠，无菌条件下取出胎肝并吹打为细胞悬液，过25‑35μm滤网制备单细胞悬液，用淋巴细胞分离液分离胎肝单个核细胞，按照0.5*106‑2*106/cm2的密度接种于培养皿中的培养液上，置于37℃，5％CO2浓度培养箱中培养，接种20‑28h后初次换液，此后每2‑3天换液，当细胞汇聚程度达78‑82％时按照1:2传代培养。(2)骨髓LK细胞分离将雌鼠经颈椎脱臼处死，无菌条件下取出胫骨及股骨，冲出骨髓细胞，过25‑35μm滤网制备单细胞悬液，再用淋巴细胞分离液分离得到骨髓单个核细胞，此后按照磁珠分选试剂盒操作流程分离出Lin‑c‑Kit+细胞，细胞计数后置于4℃备用；(3)细胞骨髓腔内移植取1％戊巴比妥钠溶液麻醉小鼠后剪开膝关节处皮肤，用0.5‑2mL注射器从开口处刺入胫骨骨髓腔，拔出针头，再用20‑30μL进样器吸取细胞悬液从刚刚的针孔处插入骨髓腔并注入细胞，注射骨髓LK细胞和胎肝基质细胞，培养6‑12周。