[发明专利]一种基于southern blot的端粒长度检测方法在审
| 申请号： | 201811146214.4 | 申请日： | 2018-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN109295165A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 顾凯强;葛远龙;李国庆;杨奇飞;黄洪斌;周君 | 申请（专利权）人： | 江苏凯强医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816 |
| 代理公司： | 北京成实知识产权代理有限公司 11724 | 代理人： | 朱明福 |
| 地址： | 226300 江苏省南通市高*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于Southern Blot的端粒长度检测方法，所述方法包含步骤：(a)从血液中提取人类基因组DNA，并配置酶切体系，反应条件为37℃水浴孵育16h，(b)将DNA酶切样本放入0.7％琼脂糖凝胶中电泳，反应条件为电压1.5V/cm，时间16h，反应过后修整琼脂糖凝胶，将其放置在干胶仪上，温度50℃，干燥1‑2h，涉及生物技术领域。该基于Southern Blot的端粒长度检测方法，避免了转膜效率对实验结果的影响以及克服了转膜对于DNA片段大小的限制，并且实验多步骤都在同一块凝胶上进行，使得实验操作连贯，实验结果稳定性高。 | ||
| 搜索关键词： | 长度检测 端粒 琼脂糖凝胶 反应条件 人类基因组DNA 生物技术领域 电泳 酶切体系 实验操作 水浴孵育 转膜效率 放入 干胶 凝胶 转膜 连贯 修整 样本 血液 配置 | ||
【主权项】：
1.一种基于Southern Blot的端粒长度检测方法，所述方法包含步骤：(a)从血液中提取人类基因组DNA，并配置酶切体系，反应条件为37℃水浴孵育16h；(b)将DNA酶切样本放入0.7％琼脂糖凝胶中电泳，反应条件为电压1.5V/cm，时间16h，反应过后修整琼脂糖凝胶，将其放置在干胶仪上，温度50℃，干燥1‑2h；(c)对琼脂糖凝胶进行处理，且处理过程通过以下步骤实现：(i)取下的琼脂糖凝胶，加入50ml变性液，在杂交炉42℃，孵育30min；(ii)倒掉变性液，加入50ml中和液，杂交炉42℃，孵育30min；再倒掉中和液并加入10ml杂交液，杂交炉42℃，并旋转1h；(iii)倒掉杂交液，加入10ml新的杂交液，且加入5ul P‑32标记的探针，杂交炉42℃，旋转时间至少为16h；(iv)倒掉杂交液，加入100ml Wash I洗液，通过杂交炉42℃，旋转20min，倒掉Wash I，加入新的100ml Wash I洗液，通过杂交炉，42℃，旋转20min，之后再重复用Wash I洗涤一次；(v)倒掉Wash I，加入100ml Wash II，杂交炉42℃，旋转20min。用Wash II重复洗涤三次；(d)倒掉Wash II，取出琼脂糖凝胶，吸干胶样上的水分，通过保鲜膜包裹好胶样，并放入空白磷屏中，暗室曝光16h至20h，再用磷屏成像仪扫描磷屏，保存图像。
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