[发明专利]一种RFFT1细胞的构建方法在审
| 申请号： | 201811153196.2 | 申请日： | 2018-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109182383A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 焦顺昌;张嵘;周子珊;解佳森;王海燕;李营营 | 申请（专利权）人： | 北京鼎成肽源生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/867;C12N9/22;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京瑞盛铭杰知识产权代理事务所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 张红 |
| 地址： | 100096 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种RFFT1细胞的构建方法，属于生物技术领域。本发明构建了一种攻防一体、精准性高、杀伤性高的T细胞。该构建方法包括以下步骤：PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行多肽冲击；冲击后扩大培养，得到FF细胞；以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激FF细胞以筛选精准多肽；培养PBMC细胞，在培养过程中，用精准多肽进行多次冲击；冲击后继续培养，得到RFF细胞；筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性细胞；由特异性细胞获取TCR基因；培养PBMC细胞，敲除原有的TCR基因和表面免疫抑制性信号分子，并转入前述所获取的TCR基因，制备得到RFFT细胞；用单抗药对前述所得RFFT细胞进行免疫抑制性信号分子封闭，得到RFFT1细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 多肽 细胞 构建 免疫抑制性 特异性细胞 信号分子 突变 肿瘤 生物技术领域 筛选 多次冲击 扩大培养 原有的 抗原 单抗 敲除 制备 转入 刺激 封闭 | ||
【主权项】：
1.一种RFFT1细胞的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：S1)PBMC细胞负载致肿瘤突变的多肽，而后对负载多肽后的PBMC细胞进行一次多肽冲击；S2)冲击后扩大培养，得到FF细胞；S3)以致肿瘤突变的多肽作为抗原直接刺激所述FF细胞以筛选精准多肽；S4)培养PBMC细胞，在培养过程中，用精准多肽进行多次多肽冲击；S5)冲击后继续培养，得到RFF细胞；S6)以精准多肽作为抗原刺激所得RFF细胞，筛选能够识别所述精准多肽的特异性细胞；S7)通过测序得到所述特异性细胞的TCRβ链CDR3区序列，由所述TCRβ链CDR3区序列扩增得到TCR基因；S8)培养PBMC细胞，敲除细胞中原有的TCR基因和表面免疫抑制性信号分子，并转入步骤S7中所得能够与精准多肽特异性结合的TCR基因，制备得到RFFT1细胞，所述免疫抑制性信号分子包括：PD‑1、Tim‑3、LAG3、CTLA‑4、BTLA、VISTA、CD160、TIGIT、2B4(CD244)。
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