[发明专利]一种关于长寿花增殖培养及植株生根的研究

摘要

一种关于长寿花增培养及植株生根的研究，本发明涉及植物生长技术领域；材料准备；试验设计；结果分析；结论总结。明确长寿花在离体快繁各阶段的具体培养基成分，培养基为MS+0.5mg/L6‑BA+1.0mg/L NAA时，茎段增殖速度快，增殖系数最高，而且幼苗株高较高，长势好，最适宜诱导长寿花的芽增殖；培养基1/2MS+1.0mg/L 6‑BA最有利于长寿花根系诱导，其芽苗根量较多，根系发达呈矮圆锥状分布，植株长势较好。

主权项

1.一种关于长寿花增培养及植株生根的研究，其特征在于：它的操作步骤如下：(1)、材料准备(1.1)、用无菌瓶苗选择生长健壮的优良枝条，切成约2.0cm的带一个茎节的茎段；(1.2)、将培养瓶及盖子等全部放入高压灭菌锅中消毒后烘干备用；(1.3)、对步骤(1.1)中的枝条进行外植体消毒：取上述切好的长寿花枝条，充分清洗表面后，在无菌条件下用无菌水对实验材料反复冲洗2～3次后75％酒精浸泡25～30s，无菌水冲洗2次，0.2％升汞溶液消毒8～9min，无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干枝条表面水分进行接种实验；(1.4)、MS培养基的准备：MS培养基为基本培养基，即，蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，PH值5.7～5.8，培养温度25～27℃，光照强度2500Lx，光照时间12h/d；(2)、试验设计(2.1)、增殖培养：在MS基本培养基上加入激素NAA和6‑BA，6‑BA设0.5、1.0、1.5mg/L，NAA设0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L，正交组合，共12个处理，每处理30瓶，每瓶接种3个茎段；(2.2)、生根培养：在MS培养基中加入激素NAA和6‑BA，在无菌环境进行茎段接种，每瓶接种2个，每个处理接种20瓶；(2.3)、不同琼脂用量设计：MS培养基作为基本培养基，蔗糖30g/L，激素6‑BA0.5mg/L和NAA1.0mg/L，分别加入琼脂粉3g/L，4.5g/L，6g/L，将茎段接种在培养基上，每瓶接种3个，每个处理接种15瓶；(2.4)、试验测定：42d后在每组处理中随机选取5瓶培养基，分别统计每株长寿花的芽增殖数和株高，42d后对统计分析的数据进行差异显著性检验、多因素方差分析和Pearson相关性分析；5d后发现有根形成，开始记录根的形状和长度，8d，10d，42d记录一次；株高是指培养基基部到植株顶端的距离；芽增殖系数＝芽苗总数/接种芽数；(3)、结果分析(3.1)、激素对增殖培养的影响(3.1.1)、对株高的影响：当NAA浓度是1.0mg/L时，6‑BA浓度是0.5mg/L株高最高且对株高影响差异显著高于1.0mg/L和1.5mg/L，但6‑BA浓度为0.5mg/L和1.0mg/L对株高影响差异均不显著；当NAA浓度是0.5mg/L时，6‑BA浓度为0.5mg/L对株高影响差异显著高于1.0mg/L和1.5mg/L，6‑BA浓度为0.5mg/L和1.0mg/L对株高影响差异不显著；当NAA浓度分别是0.1mg/L和0.3mg/L时，6‑BA浓度的不同对株高影响差异均不显著；当6‑BA浓度分别是0.5mg/L和1.5mg/L时，NAA浓度的不同对株高影响差异均不显著，当6‑BA浓度是1.0mg/L时，NAA浓度为0.1mg/L和0.3mg/L对株高影响差异均不显著，NAA浓度为0.5mg/L和1.0mg/L对株高影响差异均不显著，但NAA浓度为0.1mg/L和0.3mg/L对株高影响差异显著高于NAA浓度是0.5mg/L和1.0mg/L；(3.1.2)、对增殖系数的影响：当NAA浓度是1.0mg/L时，6‑BA浓度为0.5mg/L对增殖系数影响差异显著高于1.0mg/L，但6‑BA浓度为1.5mg/L与6‑BA浓度为0.5mg/L和1.0mg/L对增殖系数影响差异均不显著；6‑BA浓度是0.5mg/L增殖系数最高，但与其他处理株高影响差异均不显著。当NAA浓度是0.5mg/L，1.0mg/L，1.5mg/L，6‑BA浓度的不同对株高影响差异均不显著。当6‑BA浓度是0.5mg/L，1.0mg/L，1.5mg/L，NAA浓度的不同对株高影响差异均不显著；6‑BA对株高的影响达到了极显著水平，NAA对株高影响不显著，6‑BA和NAA对增殖系数影响均不显著，而两者的交互作用对增殖系数影响不显著，但对株高的影响达到了显著水平；从影响大小来看，6‑BA对株高和增殖系数的影响均大于NAA的影响；(3.2)、激素对生根培养的影响5d后，基础培养基为MS、1/2MS、1/4MS，NAA均为0的生根培养处理较少有根形成，根量少，约1‑3根；8d后，基础培养基为1/2MS、1/2MS、1/2MS，6‑BA为0.5、1/4MS，NAA为0.5、1、0、0.5的生根培养处理有根形成，约2‑5根；10d后，基础培养基为MS、1/2MS、1/4MS，NAA均为0的生根培养处理根细长，约0.8cm‑1.5cm，根数一般，较少无根出现；基础培养基为MS、MS、1/2MS，6‑BA为0.5、1/2MS，6‑BA为0.5，NAA为0.5、1、0.5、1的生根培养处理开始有根形成，根少，约0.2cm‑0.3cm；基础培养基为1/2MS，NAA为0的生根培养处理根较多，约7‑8根，长约0.2cm，较少根长约1.0cm；基础培养基为1/2MS、1/2MS，NAA为0.5、1的生根培养处理根量较少，约4‑5根，长约0.2cm；基础培养基为1/2MS，6‑BA为0.5、1/4MS、1/4MS，NAA为0、0.5、1的生根培养处理根多但短，约0.1cm‑0.3cm。42d后，基础培养基为1/2MS，6‑BA为0.5，NAA为0和基础培养基为1/2MS，6‑BA为0.5，NAA为0的生根培养处理的长寿花根短且少，植株矮小，叶片发黄；基础培养基为1/2MS，6‑BA为0.5，NAA为0.5的生根培养处理的根长但极少，植株矮小；基础培养基为MS、MS、MS、1/2MS，NAA为0、0.5、1、0生根培养处理的长寿花根稍长，数量也稍多；处理组基础培养基为1/2MS、1/4MS、1/4MS，NAA为1、0、0.5的生根培养对诱导长寿花生根效果显著；结合后期观察，处理组处理组基础培养基为1/2MS，NAA为1的根系长，根量多且粗壮，植株较健壮，生根诱导效果显著；(3.3)、不同琼脂用量对植株的影响琼脂粉用量为3g/L和4.5g/L处理植株大多呈倾斜式生长，浸入培养基中的叶片逐渐分化成愈伤组织，处理组琼脂粉用量为6g/L植株生长健壮，叶片形态正常且植株直立生长；(4)、结论总结在增殖培养中，加入激素6‑BA和NAA的培养基，都能诱导茎段产生不定芽，但效果差异显著，当6‑BA浓度为0.5mg/L，NAA浓度为1.0mg/L时，株高最高，增殖系数最大；当6‑BA浓度为1.5mg/L，NAA浓度为0.5mg/L时，株高2.38最低，增殖系数6.80较大；当6‑BA浓度为1.0mg/L，NAA浓度为0.3mg/L时，增殖系数5.00最小，株高3.36最低，分析其中原因：激素6‑BA和NAA的浓度配比影响长寿花芽的增殖，与目前研究结果保持一致，细胞分裂素和生长素的比值直接影响了叶片的再生；当6‑BA浓度不变时，随着NAA浓度的增加，根的质量并没有呈现一直增加趋势，而出现了下降现象；当NAA浓度不变时，随着6‑BA浓度的增加，部分处理的根质量降低，究其原因：激素6‑BA和NAA的浓度影响长寿花根系的生长，与目前研究结果保持一致，植物生长调节剂显著影响组织培养；较少植株茎段末端或浸入培养基中的叶片膨大成球逐渐形成愈伤组织，分析其中原因：叶片比茎段更适合进行愈伤组织的诱导；6‑BA影响毛状根的生长和衰老，部分长寿花在培养过程中根萌发时间较长或根数量少或出根的质量不佳，甚至有的植株直到培养后期都没有实根形成，分析其中原因，可能是长寿花植株个体的差异、实验中激素的使用和培养条件对其的影响；植株在琼脂粉用量为6g/L处理直立生长且叶片形态正常，较健壮；在琼脂粉用量为3g/L和4.5g/L处理倾斜生长，琼脂浓度大更利于植株的直立生长，与目前研究结果一致，琼脂的凝胶强度值随着琼脂质量分数的增大而增大；MS+6‑BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L是最适宜于长寿花增殖的培养基，最有利于长寿花生根诱导的培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L；植株在固态培养基中可以正常生长。