[发明专利]葡萄浆果内坏死病毒侵染性克隆及其构建方法有效

专利信息
申请号: 201811157115.6 申请日: 2018-09-30
公开(公告)号: CN109266643B 公开(公告)日: 2022-01-21
发明(设计)人: 范旭东;董雅凤;张尊平;任芳;胡国君 申请(专利权)人: 中国农业科学院果树研究所
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/34;C12N1/21;C12R1/01
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅;陈晓庆
地址: 125100 辽宁省葫芦岛市兴*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要: 发明公开了一种葡萄浆果内坏死病毒侵染性克隆及其构建方法。该侵染性克隆载体是将分段扩增的葡萄浆果内坏死病毒基因组片段通过无缝克隆方式,连接至含有双35S启动子和核酶HDV‑RZ的pCB301‑2x35S‑HDVRZ‑NOS载体而获得。通过冻融法将此载体转入农杆菌EHA105感受态细胞,并通过农杆菌接种西方烟草和葡萄验证其侵染性。本发明构建的GINV侵染性克隆能够在农杆菌EHA105菌株中稳定、高效表达,并能成功侵染西方烟草和葡萄寄主。GINV侵染性克隆的获得,使得GINV的研究易于在DNA水平上操作,为后续开展GINV的生物学特性和致病性研究提供有力的工具。
搜索关键词: 葡萄 浆果 坏死 病毒 侵染 克隆 及其 构建 方法
【主权项】:
1.一种葡萄浆果内坏死病毒侵染性全长cDNA克隆的构建方法,包括如下步骤:将葡萄浆果内坏死病毒基因组全长cDNA第1‑4978位所示的DNA片段和葡萄浆果内坏死病毒基因组全长cDNA第4962‑7229位所示的DNA片段通过无缝克隆方式连接至植物表达载体中,得到含有葡萄浆果内坏死病毒全长cDNA的重组表达载体;所述重组表达载体即为葡萄浆果内坏死病毒侵染性全长cDNA克隆;所述葡萄浆果内坏死病毒基因组全长cDNA序列如序列表中序列1所示。
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