[发明专利]一种从元麦麸皮中制备高纯度β-葡聚糖的方法

摘要

本发明公开了一种从元麦麸皮中制备高纯度β‑葡聚糖的方法，利用元麦麸皮为原料，采用生物酶技术对元麦β‑葡聚糖进行初提纯，即采用碱性蛋白酶进行提取，α‑淀粉酶去除淀粉、中性蛋白酶—胰蛋白酶双酶法去除蛋白。上述初纯品经柱层析进一步纯化，透析后即可制得β‑葡聚糖纯品。本制备方法，可使元麦β‑葡聚糖产品纯度高达97.42%左右，制备工艺安全，作用条件温和，对环境污染小，增加了经济效益，为本地区元麦产品深加工技术研发建立基础，对促进本省及周边地区元麦产业链延伸、产业升级与增值提供可行途径与发展思路。

主权项

1.一种从元麦麸皮中制备高纯度β‑葡聚糖的方法,其特征在于：包括以下步骤：（1）元麦麸皮粉的制备：将元麦麸皮烘干，粉碎，过60目筛网；（2）预处理：在烧杯中加入步骤（1）所得的元麦麸皮粉和80%乙醇，搅拌均匀，倒入回流瓶中，在80℃回流2h，达到灭酶、脱脂作用；（3）酶解：将步骤（2）所得的元麦麸皮粉溶于一定量的蒸馏水中，pH值用1mol/mLNaOH溶液调节至9.0，将溶液加热到45℃后，向其中加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解完后煮沸10分钟使酶失活，5000 r／min离心30min，收集滤液；（4）耐热α‑淀粉酶除淀粉：用1mol/mLHCl溶液调节步骤（3）中得到的酶解液，使其pH值到5，加热到90℃，加入7.5mg/100mL耐热α‑淀粉酶，酶解30min后，煮沸10min使酶失活，5000 r／min离心30min，收集滤液；（5）复合酶法除蛋白：用1mol/mLNaOH溶液调节步骤（4）中得到的酶解液，使其pH值到7.5，向溶液中加入中性蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解，酶解完后煮沸10min使酶失活，5000 r／min离心30min，收集滤液；（6）醇沉：将步骤（5）中的滤液经过旋转蒸发浓缩，在浓缩液中倒入3倍体积95％乙醇，同时要剧烈搅拌，放置于4℃过夜,再离心，离心速率5000 r／min，时间30 min，取沉淀，将此沉淀溶解于50倍量水中，‑50℃真空干燥后即得硫酸软骨素初纯品；（7）DEAE‑52纤维素柱层析：将步骤（6）中得到的β‑葡聚糖初纯品溶于适量的水中，配制成10mg/mL的溶液，经DEAE‑52离子纤维素柱进行层析，分别用纯水和0.05mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂进行洗脱，流速为1mL/min，每管收集5mL，采用苯酚‑硫酸法测定多糖的分布，280nm比色法检测蛋白质的分布，将所得组分浓缩后进行冷冻干燥；（8）SephadexG‑100柱层析：将经步骤（7）收集到的β‑葡聚糖样品配制成5mg/mL的溶液，经Sephadex G‑100柱层析进行分析，以0.1mol/L的NaCl溶液进行洗脱，流速为0.6mL/min，以每管5mL进行收集，苯酚‑硫酸法逐管检测多糖的分布，280nm比色法检测蛋白质的分布；（9）膜透析，干燥：将步骤（8）所得各组分进行适当浓缩后，置于5000‑8000D透析袋中4℃透析48h，真空冷冻干燥后获得β‑葡聚糖纯品。