[发明专利]检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N-乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法

摘要

本发明涉及食品药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非化学品的定性筛选和确证方法。该方法的原理为：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱‑串联质谱测定，外标法定量确认。该方法的实验结果均满足要求，表明本法可专属、灵敏、快速地初筛和确证补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非。

主权项

1.一种检测去甲基卡波地那非、丙氧基艾地那非、N‑乙基他达拉非和羟丙基去甲基他达拉非方法，其特征在于：试样经乙腈超声提取，过滤后，滤液供液相色谱‑串联质谱测定，外标法定量；具体包括如下步骤：（1）标准溶液配制1.1、标准储备液：分别称取去甲基卡波地那非、N‑乙基他达拉非、丙氧基艾地那非和羟丙基去甲基他达拉非各10.0mg，用乙腈溶解并稀释至25mL，摇匀，制成浓度为400μg/mL标准储备液，‑20℃保存；1.2、混合标准中间液Ⅰ：分别吸取丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非标准储备液0.1mL和吸取去甲基卡波地那非0.5mL，分别用乙腈定容至10mL，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度为4μg/mL，去甲基卡波地那非浓度为20μg/mL，作为混合标准中间液Ⅰ，‑20℃保存；混合标准中间液Ⅱ：准确吸取混合标准中间液Ⅰ1.0mL于100mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，摇匀，制成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度为40ng/mL，去甲基卡波地那非浓度为200ng/mL，作为混合标准中间液Ⅱ，‑20℃保存；1.3、标准系列工作液的制备：分别吸取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL的混合标准中间液Ⅱ，用空白溶剂乙腈及空白基质提取液定容至10mL，将其稀释成丙氧基艾地那非、羟丙基去甲基他达拉非、N‑乙基他达拉非的浓度分别为0.4ng/mL、0.8ng/mL、2.0ng/mL、4.0ng/mL、6.0ng/mL、8.0ng/mL，去甲基卡波地那非浓度分别为2.0ng/mL、4.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL），作为标准系列工作液；（2）、试样制备2.1、固态试样称取0.5g试样于25mL容量瓶中，加入乙腈20mL，超声提取20min，放冷，乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用；2.2、液态试样吸取0.5mL于25mL容量瓶中，加入乙腈定容至刻度，摇匀，用滤膜过滤，取续滤液，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内，备用；2.3、空白试验不加试样按试样同法处理，制得空白溶液；称取与试样等量的空白基质试样，按试样同法处理，制得空白基质试样溶液，备用；（3）、仪器参考条件3.1、色谱条件a）、色谱柱：C18；b）、流动相：A为乙腈，B为0.1%甲酸水溶液；c）、流速：300μL/min；d）、柱温：35℃；e）、进样量：2μL；3.2、质谱条件a）、离子源：电喷雾离子源；b）、扫描方式：正离子扫描；c）、检测方式：多反应离子监测；d）、干燥气、雾化气、加热气均为高纯氮气，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，干燥气流速、加热气流速、雾化气流速、接口温度、脱溶剂管温度、加热器温度、碰撞能量参数应优化至最佳灵敏度；（4）、定性测定按照高效液相色谱—串联质谱条件测定试样和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中各化合物的色谱保留时间，当试样中检出与某标准品质量色谱峰保留时间一致的色谱峰，并且试样色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过规定的范围，确定试样中检出相应化合物；（5）、定量测定5.1、标准曲线的制作将标准系列工作液分别按仪器参考条件进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积；以混合标准工作溶液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；5.2、试样溶液的测定将试样溶液按仪器参考条件进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积；根据标准曲线得到待测液中组分的浓度，平行测定次数不少于两次；5.3、空白基质试样溶液的测定空白基质试样溶液的测定同5.2；（6）、分析结果的表述将高效液相色谱‑串联质谱测得浓度代入下式计算含量：…………………………………………（1）式中：X—试样中各待测物的含量，单位为毫克每千克；c—从标准曲线中读出的供试品溶液中各待测物的浓度，单位为微克每升；V—样液最终定容体积，单位为毫升；m—试样溶液所代表的质量，单位为克；K—稀释倍数；计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示。