[发明专利]一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法

摘要

本发明公开了大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，包括如下步骤：（1）培养基的配制；（2）接种；（3）菌体培养。本发明提供了一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，在保持较高的单位菌体质粒含量的基础上，能显著提高大肠杆菌的纯度，不需要进行菌体的纯化培养，简化了大肠杆菌的培养过程，提高了质粒DNA的纯度和含量，具有很好的市场推广应用价值。

主权项

1.一种大肠杆菌高效表达质粒DNA的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）培养基的配制：a. 称取相应重量份的牛肉膏2.5~3.5份、蛋白胨10.5~11.5份、氯化钠2.2~2.8份、改性碳酸镧3.2~3.8份、活性炭1.2~1.8份、酒石酸0.32~0.38份、柠檬酸0.12~0.18份、甘油12.5~13.5份、去离子水820~880份备用；b. 将操作a中称取的牛肉膏、蛋白胨、氯化、改性碳酸镧、活性炭、酒石酸、柠檬酸、甘油、去离子水共同投入搅拌罐内，将搅拌罐内的温度控制为97~99℃，持续搅拌32~38min，在搅拌的同时进行射线辐照处理；c. 等到操作b中所得溶液内的温度降至42~48℃时，用1.2~1.8mol/L的盐酸溶液或1.2~1.8mol/L的氢氧化钠溶液将操作b中所得的溶液的pH调至7.4~7.6；（2）接种：取100~120μL氨苄青霉素投入200~300mL步骤（1）所配制的培养基中，然后取100~120μL大肠杆菌DH5α菌株接种到添加有氨苄青霉素的培养基中，再称取特制的复合粉投入含有菌株和氨苄青霉素的培养基中；（3）菌体培养：将步骤（2）中的培养基置于恒温摇床上进行菌株培养，在培养的同时进行声光波交替联合处理，摇菌培养直到菌液的OD600达到0.9~1即可。