[发明专利]一种预测混合氮源下组培苗同化铵盐份额及培养基中铵盐最适浓度的方法

摘要

本发明公开一种预测混合氮源下组培苗同化铵盐份额及培养基中铵盐最适浓度的方法。将组培苗分别培养在铵盐与两种稳定氮同位素值不同的硝酸盐组成的混合氮源的培养基上；测定不同铵盐浓度下两种混合氮源培养下组培苗叶片稳定氮同位素值；计算不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额，构建不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额随铵盐浓度变化的关系模型，获取模型的参数，将被考察的培养基中的铵盐浓度值代入模型，求出被考察的培养基中组培苗同化铵盐份额，并将0.741作为组培苗同化铵盐份额代入模型，求出待测混合氮源下组培苗培养基中铵盐最适浓度。

主权项

1.一种预测混合氮源下组培苗同化铵盐份额及培养基中铵盐最适浓度的方法，其特征在于：包含以下步骤：第一，将待测组培苗通过调节培养基的激素比例使其处于增殖阶段，形成无根的组培苗；第二，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的硝酸盐的稳定氮同位素比值，筛选出稳定氮同位素值差值大于10‰的两种硝酸盐，其稳定氮同位素值分别为δ15N01和δ15N02；分别将这两种硝酸盐作为唯一氮源配置为待考察的硝酸盐浓度的培养基；第三，取带有1个单芽的待测组培苗分别培养在上述稳定氮同位素值不同的两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基中；第四，组培苗经过5周培养后，分别测定上述两种硝酸盐作为唯一氮源的培养基培养下的组培苗叶片的稳定氮同位素值，其叶片稳定氮同位素值分别记为δ15NN1和δ15NN2；第五，通过测定用于配置植物组织培养的培养基中的铵盐的稳定氮同位素比值δ15NA，选出其稳定氮同位素比值δ15NA与δ15N01和δ15N02均大于10‰的铵盐；第六，将稳定氮同位素值为δ15N01和δ15N02的硝酸盐分别与上述铵盐配置成待考察的硝酸盐浓度下、不同铵盐浓度的两组混合氮源培养基；第七，同样，将带有1个单芽的待测组培苗，分别同时培养在上述两组混合氮源培养基上；第八，同样，待组培苗培养5周后，测定在上述两组混合氮源培养基上培养的组培苗不同铵盐浓度下叶片稳定氮同位素值，铵盐与稳定氮同位素值为δ15N01的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ15NN1mix，铵盐与稳定氮同位素值为δ15N02的硝酸盐组成的混合氮源培养基培养下的组培苗叶片稳定氮同位素值记为δ15NN2mix；第九，利用δ15NN1、δ15NN2以及同一铵盐浓度下的δ15NN1mix和δ15NN2mix，分别计算待考察的硝酸盐浓度下不同铵盐浓度的组培苗利用硝酸盐份额fb；第十，依据待测硝酸盐浓度下不同铵盐浓度下组培苗利用硝酸盐的份额fb；计算待测硝酸盐浓度下不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额fa；第十一，以酶动力学的米氏方程建立不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额f_a随铵盐浓度变化的关系模型；这里的米氏方程的表达式为：这里的f_a为不同铵盐浓度的组培苗铵盐利用份额，c_a为培养基中铵盐浓度，f_max和K_f值为米氏方程的常数；第十二，依据上述模型的f_max和K_f值，并将被考察的培养基中的铵盐浓度值作为c_a代入求出被考察的培养基中组培苗同化铵盐份额。第十三，依据上述模型的f_max和K_f值，并将f_a＝0.741代入求出培养基中的铵盐浓度值c_a，此时的c_a即为待测混合氮源下组培苗培养基中铵盐最适浓度。