[发明专利]一种雪旺细胞与神经干细胞联合LC-PLGA导管及其应用

摘要

本发明涉及一种雪旺细胞与神经干细胞联合LC‑PLGA导管及其应用，所述雪旺细胞与神经干细胞联合LC‑PLGA导管的连接方法如下：首先将神经断端近心端套入LC‑PLGA导管内，套入长度为1mm，神经断端外膜与神经导管以10‑0缝合线缝合，然后将22.5μlmatrigel、3.75μl雪旺细胞和3.75μl神经干细胞混合物注入导管内，远心端以同样的方法处理，导管内神经断端间距为5mm。本发明还包括雪旺细胞与神经干细胞联合LC‑PLGA的应用，应用于神经修复。本发明制备的上述修复神经导管具有很好的生物相容性、可降解性；且应用时可很好地促进受损神经的修复，具有很好的应用前景。

主权项

1.一种雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin‑chitosan‑PLGA导管，其特征在于，所述雪旺细胞与神经干细胞联合Laminin‑chitosan‑PLGA导管的制备方法具体如下：(1)制备Laminin‑chitosan‑PLGA导管：首先将PLGA导管浸渍于浓度为0.1％的壳聚糖溶液中，30min后将其取出并刷去导管表面的壳聚糖，然后做晾干及干燥处理，15min后将PLGA导管内的芯轴抽出得到chitosan‑PLGA导管；最后将制备好的chitosan‑PLGA导管浸泡在浓度为0.2mg/ml的层粘连蛋白水溶液中，20min后将其取出水洗，并在chitosan‑PLGA导管表面进行重复层粘连蛋白膜的处理得到Laminin‑chitosan‑PLGA导管，将得到的Laminin‑chitosan‑PLGA导管剪切成长度为7mm的导管，备用；(2)神经干细胞的获取及培养：首先将SPF级别孕14‑16天SD大鼠脱臼处死，使用75％酒精喷洒躯干消毒，腹部切口，将子宫拉出并结扎子宫动脉后，于子宫颈处剪断，将子宫置于盛有D‑Hanks液的培养皿中，同时用PBS对其进行冲洗，然后将子宫剪开并取出胚胎，同时使用显微镊离断胎头；在解剖显微镜下将大脑半球分离，并剥除血管膜，分离出海马组织，将分离出的海马组织转移至预先铺有DMEM/F12的培养皿中，使用巴斯德吸管轻柔吹打，将细胞悬液离心处理，最后将得到的细胞沉淀使用神经干细胞完全培养基重悬并计数，将细胞以1×106个/ml的密度种植于T25培养瓶中，并置于37℃，5％CO2的培养箱中，每两天换一次液，每七天传代一次；(3)雪旺细胞的获取及培养：首先将3‑5天新生SD大鼠颈椎脱臼处死，之后用75％酒精消毒，在无菌条件下取出坐骨神经，使用D‑Hanks液洗去血细胞，解剖显微镜下除去外膜及结缔组织，并将神经剪碎，将减碎的神经片段与0.2％NB4的体积：Dispase的体积＝3:1的溶液混合，然后进行振荡、离心，弃上清并重悬，最后将细胞种于细胞培养皿，每隔一天换液并传代；(4)连接神经干细胞、雪旺细胞和Laminin‑chitosan‑PLGA导管：首先将神经断端的近心端套入Laminin‑chitosan‑PLGA导管，神经断端近心端的套入长度为1mm，再将神经断端外膜与Laminin‑chitosan‑PLGA导管以10‑0缝合线缝合；然后将matrigel、雪旺细胞和神经干细胞的混合物注入Laminin‑chitosan‑PLGA导管内；最后将神经断端的远心端以同近心端的处理方式进行处理。