[发明专利]一种基于非线性杂交链式扩增的适配体-DNA高分子聚合物的构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种基于非线性杂交链式扩增的DNA高分子聚合物的构建和应用，该体系是在系统中引入一条引发链，通过非线性杂交链式反应，诱发六条不同的非发夹状核酸探针级联自组装形成DNA高分子聚合物。在此基础上，又以磷酸化酶处理部分组装序列的5’端，在连接酶的作用下形成稳定性更高的DNA组装体。在其黏性末端结合上核酸适配体来靶向识别目标细胞以及引入细胞毒性药物阿霉素，实现对靶细胞的成像和给药。

主权项

1.一种基于非线性杂交链式扩增的适配体‑DNA高分子聚合物的构建方法，其特征在于，包括四条基底链S1、S2、S3、S4，两条辅助链H1、H2，一条引发链和一条适配体链，碱基序列如下：基底链S1：GTGTGCCTATTATGTCtcctcctGTGTGCCTATTATGTCtcctcctCAGCTTCATCAACTAGTTcgtca基底链S2：AACTAGTTGATGAAGCTGGACATAATAGGCACACGACATAATAGGCACAC基底链S3：aggagGAGACATAATAGGCACACtgacgaaCTAGTTGATGAAGCTG基底链S4：CAGCTTCATCAACTAGGTGTGCCTATTATGTCTC辅助链H1：GTGCCTATTATGTCGTGTGCCTATTATGTCCAGCTT辅助链H2：GCACACCTAGTTGATGAAGC引发链：tgacgAACTAGTTGATGAAGCTG适配体链：ATCTAACTGCTGCGCCGCCGGGAAAATACTGTACGGTTAGAaaaaaCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA；具体包括以下步骤：（1）将基底链S1与S3分别溶解后，用1uL磷酸化酶处理，在PCR仪中37℃反应1‑3h后，80‑95℃处理10min，结束磷酸化过程，得到基底链S1*和S3*；（2）基底链S1*与S2、基底链S3*与S4分别按比例混合，在PCR仪中80‑90℃退火处理10min，并进行程序降温，使其以0.1℃/s冷却至25℃，得到主链S1*S2和主链S3*S4，放置4℃备用；（3）主链S1*S2和主链S3*S4溶液中分别加入辅助链H1和H2，在PCR仪中37℃孵育30min；（4）将步骤（3）得到两个溶液混合均匀，加入引发链，充分混匀后在37℃孵育60min，使其自主进行非线性杂交链式反应；（5）向步骤（4）得到的溶液中加入适配体链，充分混匀后在37℃孵育60min，得到末端有适配体连接的DNA高分子聚合物；（6）将步骤（5）中得到的溶液中加入连接酶，在PCR仪中进行连接反应，16℃反应2‑4h，最终得到缺口闭合、在血清和高温中稳定存在的适配体‑DNA高分子聚合物。