[发明专利]一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ-聚谷氨酸的方法

摘要

本发明涉及一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ‑聚谷氨酸的方法，包括以下步骤：菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上培养活化；种子液的制备；将活化后的斜面种子接种于种子培养基中，得产γ‑聚谷氨酸的种子液；将种子液接种于发酵培养基中发酵，且发酵时间为24h‑66h时，流加浓度为4g/L‑6g/L的蔗糖溶液；发酵结束后离心去菌体，醇沉析出聚谷氨酸，干燥，制备出干粉状γ‑聚谷氨酸。本发明在发酵过程中流加蔗糖，利用蔗糖替代葡萄糖或者辅助葡萄糖的方法，不仅可以提高γ‑聚谷氨酸的产量，还能延缓菌体衰老，延长发酵时间。

主权项

1.一种利用地衣芽孢杆菌发酵时流加蔗糖生产γ‑聚谷氨酸的方法，其特征是，包括以下步骤：菌种活化：将地衣芽孢杆菌的原始菌株接种在斜面培养基上，于30℃‑37℃培养16‑18小时，制备活化后的斜面种子；所述地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）TKPG091，该菌株已于2009年10月14日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为 CGMCC No.3336；（2）种子液的制备；将步骤（1）中活化后的斜面种子接种于种子培养基中，37℃，摇床转速220rpm培养16小时至对数生长期，得到产γ‑聚谷氨酸的种子液；（3）发酵罐发酵：按照以发酵培养基体积计，5％接种量，将步骤（2）中的种子液接种于发酵培养基中，控制初始发酵温度37‑38℃，罐压0.02‑0.05MPa；通风量0.5‑1.5vvm；初始发酵液pH值调至7.0，培养72小时；在发酵时间为24h‑66h期间的42h内，均匀流加蔗糖溶液，流加量按培养基体积计算，为每升4g‑6g；（4）提取：发酵结束后离心去菌体，然后用4‑5倍上清液体积的乙醇，醇沉析出聚谷氨酸，然后再复溶于上清液体积的蒸馏水后，干燥；制备出干粉状γ‑聚谷氨酸。