[发明专利]一种水牛睾丸单细胞悬浮液的制备方法在审
| 申请号： | 201811197260.7 | 申请日： | 2018-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN109402046A | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 卢克焕;李婷婷;陆阳清;杨小淦;梁兴伟 | 申请（专利权）人： | 卢克焕;广西大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京君恒知识产权代理事务所(普通合伙) 11466 | 代理人： | 谭月萍;黄启行 |
| 地址： | 530004 广西壮族自治区南宁市西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种水牛睾丸单细胞悬浮液的制备方法，包括以下步骤：(1)原料预处理：取水牛睾丸消毒后剪去白膜，清洗干净剪成小块；(2)消化：将剪碎后的睾丸转移至培养皿中，加入一级消化液消化至呈单个精细小管后，离心弃去上清液；(3)一级重悬：用PBS重悬沉淀，离心去除上清液，重复两次后得到底层的重悬液；(4)细胞分离：进行二级消化后，放置于显微镜观察用移液器吹成单个细胞,中和后收集至离心管离心，去除上清液得到初级细胞悬浮液；(5)二级重悬：使用培养液进行重悬，使用细胞网过滤后获得水牛睾丸单细胞悬液。本发明提供了一种分离速度快，效果好的水牛精原干细胞悬浮液的制备方法，且该方法操作简便可行，易于实现。 | ||
| 搜索关键词： | 睾丸 水牛 重悬 上清液 制备 单细胞悬浮液 悬浮液 消化 培养皿 培养液 单细胞悬液 精原干细胞 显微镜观察 原料预处理 初级细胞 单个细胞 离心去除 细胞分离 离心管 消化液 移液器 重悬液 剪去 剪碎 取水 去除 小管 小块 沉淀 过滤 清洗 精细 消毒 中和 细胞 重复 | ||
【主权项】：
1.一种水牛睾丸单细胞悬浮液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)原料预处理：取水牛睾丸消毒后在超净台中剪去白膜，清洗干净后置于培养皿中剪成小块，再转移至EP管中剪碎；(2)消化：将步骤(1)中剪碎后的睾丸组织转移至培养皿中，加入一级消化液置于培养箱中消化至睾丸组织基本消化呈单个精细小管后，转移至离心管离心，并弃去上清液得到下层浊液；(3)一级重悬：步骤(2)中得到的下层浊液用PBS重悬沉淀，离心去除上清液，重复两次后得到底层的重悬液；(4)细胞分离：将步骤(3)中的重悬液转移至培养皿中加入二级消化液消化2～5min将精细小管内部精原干细胞释放出来，放置于显微镜下观察并用移液器吹成单个细胞,使用含血清的IMDM将其中和后使用移液器将细胞收集至离心管中，离心后去除上清液得到初级细胞悬浮液；(5)二级重悬：将步骤(4)中的初级细胞悬浮液使用培养液进行重悬后，使用细胞网过滤后获得水牛睾丸单细胞悬液。
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