[发明专利]研究离体百合植株同化物运输方向和路径的荧光示踪方法

摘要

本发明涉及植物细胞生理学研究技术，旨在提供一种研究离体百合植株同化物运输方向和路径的荧光示踪方法。包括：在离体百合鳞茎的外层鳞片切口或叶片维管束横断面敷以浸润了CFDA溶液的医用药棉，以石蜡封口膜包裹后，用锡箔纸覆盖；再以原培养条件继续培养72h；在拟观察部位徒手切片取样，用荧光显微镜观察CF在切片内的分布图像并拍照。本发明采用的荧光染料CFDA对细胞无毒、化学惰性，且量子产率比较高，在尽量不损害卸载机制的情况下，可从活细胞水平适时追踪不同发育时期百合鳞茎内同化物的运输方向和路径，比传统的显微放射自显影技术更安全、更简单。不需样品的特殊处理、成本低廉，可快速、有效地获得理想的标记结果。

主权项

1.一种研究离体百合植株同化物运输方向和路径的荧光示踪方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)准备植株和染料(1.1)以生长于培养基中的离体百合鳞茎作为待处理植株；(1.2)配制质量浓度为1～2mg/mL的CFDA荧光染料溶液；取120μl CFDA溶液，将医用药棉浸润至饱和；(2)将染料引入植株(2.1)选择离体百合鳞茎的外层鳞片或叶片作为引入部位，用双面刀在鳞片中部横切0.3mm宽的楔形切口，深度以贯穿维管束为准；或者，选择百合离体植株的叶片作为引入部位，用耐水细砂纸将叶背末端轻轻摩擦至磨破维管束；(2.2)将浸润了CFDA溶液的医用药棉塞进鳞片切口，或平铺在叶片维管束横断面处；用石蜡封口膜包裹鳞片或叶片后，先以丙酮浸润的医用药棉封塞再用石蜡封口膜包裹；最后用锡箔纸覆盖鳞片或叶片的切口部位，防止CFDA见光分解；(2.3)将处理后的离体百合鳞茎置于原培养基中，并以原培养条件继续培养72h；(3)采样和制备切片将百合离体植株从培养基中取出，洗净并擦干后，在拟观察部位取样；用双面剃须刀片对取样进行徒手切片操作，切片立即置于滴有80％甘油液滴的载玻片；使切片平铺在载玻片的中央，盖上盖玻片；(4)观察与拍照用荧光显微镜观察羧基荧光素在切片内的分布图像，根据观察对象调整目镜和物镜倍数，对观察到的样本进行拍照。