[发明专利]一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法

摘要

本发明涉及一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法。所述的畜肉中左旋咪唑含量的检测方法.采用超声提取法以及同位素稀释技术，超高压液相色谱‑串联质谱法测定畜肉中左旋咪唑的方法。

主权项

1.一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法, 其特征在于,所述的畜肉中左旋咪唑含量的检测方法,包括以下步骤：（一）待测物质的提取:称取待测均匀样品2.0g于50mL聚丙烯塑料离心管中，加入40μL内标（100ng/mL），再加入10mL乙腈，于30℃水浴下超声提取30 min。提取结束后， 4500 转/min的转速离心5 min;（二）提取液的净化:取步骤（一）离心后所得上层提取液5 mL过活化后的HLB固相萃取柱净化（分别用3.0mL乙腈、3mL超纯水活化），收集流出液与5mL玻璃试管中;（三）提取液的浓缩:将步骤（二）所收集的洗脱液于45℃水浴下氮吹至近干，加入10%乙腈含0.2%甲酸溶液溶解定容至1.0mL，涡旋混匀后过0.22μm滤膜，UPLC‑MS‑MS分析测试;（四）仪器条件:色谱柱： BEH C18柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm，Waters公司）；柱温：40℃；流速为0.3 mL/min；流动相为(A)0.3%甲酸；(B)乙腈；进样方式：梯度洗脱，梯度洗脱程序如表1所示。进样体积：2.0μm; 质谱参数：电喷雾电离负离子模式（ESI‑）；毛细管电压：3000 V；干燥气温度：160℃；干燥气流速：16L/min；雾化气压力：30 psi；鞘气温度：350 ℃；鞘气流速：12 L/min；扫描模式：多反应监测（MRM）；（五）所述的左旋咪唑结构为,分子量为204.29，CAS号为：14769‑73‑4; （六）标准曲线的制备:分别准确称取适量左旋咪唑标准品和内标于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解后定容至刻度，充分混匀得到标准储备液，于‑18℃冰箱中放置保存。以标准储备液配制出100ng/mL 的中间液和内标中间液，再分别取适量中间液及内标中间液以10%乙腈含0.2%甲酸稀释成1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的标准曲线系列，内标浓度均为2.0ng/mL，按照步骤（四）进样分析;（七）定量方法UPLC‑MS‑MS进样分析后，以标准曲线溶液中左旋咪唑的峰面积与其内标的比值为Y值，浓度为X（ng/mL）值，进行标准曲线拟合，得出各物质标准曲线Y=AX+B；样品的测定结果按式（1）计算：w = ‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑（1）式中：w ──样品中左旋咪唑的含量，单位为微克每千克（μg/kg）；  ──标准曲线计算出的样品的浓度（ng/mL）；V ──样品的定容体积，单位为毫升（mL）；──稀释倍数；m ──样品称样量，单位为克（g）。