[发明专利]一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法有效
| 申请号： | 201811208538.6 | 申请日： | 2018-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN109266680B | 公开（公告）日： | 2020-09-25 |
| 发明（设计）人： | 琚存祥;赵静;张明坤;李松;侯欢欢;高翔 | 申请（专利权）人： | 江苏集萃药康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京天盾知识产权代理有限公司 11421 | 代理人： | 孙倩倩 |
| 地址： | 210032 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法。该方法采用体外表达纯化的Cas9蛋白、预先用胚胎进行sgRNA切割效率测试筛选出的高效率sgRNA、以及单链DNA作为打靶载体，将三者混合后进行胚胎注射及移植；移植后生出的小鼠标记为F0，将F0进行基因型鉴定，对已经性成熟且基因型鉴定正确的F0进行配繁，其后代小鼠标记为F1，对F1小鼠进行分析验证，基因型验证正确的F1小鼠即为制备的CKO/KI动物模型。本发明方法流程完善，可以同期开展多项技术服务，满足不同定制化需求，解决了Cas9‐mRNA质量较难控制、sgRNA体内切割效率未知、双链打靶载体随机插入等问题，降低了实验成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 应用 cas9 技术 制备 cko ki 动物 模型 方法 | ||
【主权项】：
1.一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法，其特征在于，是将体外表达纯化的Cas9蛋白、预先用胚胎进行sgRNA切割效率测试筛选出的针对待改造基因位点的高效率sgRNA、以及根据模型需求制备的单链DNA打靶载体，三者混合后进行动物胚胎注射及移植；将移植后出生的F0代小鼠进行基因型鉴定，鉴定正确的F0进行配繁以获得F1代小鼠，对F1代小鼠进行鉴定分析验证，得到CKO/KI动物模型。
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