[发明专利]一种表达ALV-K囊膜蛋白的重组病毒的构建方法

摘要

本发明公开了一种构建表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒方法，具体为：设计PCR扩增ALV‑J传染性克隆线性化表达载体引物以及PCR扩增ALV‑K‑env基因引物序列；PCR扩增ALV‑K囊膜蛋白基因片段和ALV‑J传染性克隆线性化载体，构建重组传染性克隆质粒，并将重组质粒转染DF‑1细胞拯救出表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。本发明利用ALV‑J传染性克隆，构建了高效复制及表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。这一重组病毒的获得不仅为研究ALV‑K囊膜蛋白功能受体及其致病性打下了基础，更能够为临床检测ALV‑K的中和抗体提供靶向病毒。

主权项

1.一种表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：1）利用引物1，以ALV‑J传染性克隆质粒为模板， PCR扩增出ALV‑J传染性克隆线性化表达载体；所述引物1为：ALV‑J‑linear‑F：TAGGTTCCGAACGCGATGTAACGGGGCAAG；ALV‑J‑linear‑R：CTGCAAAGAGAGGGCTCGCCTCATCCTTC。2）利用引物2，以ALV‑K前病毒DNA为模板，PCR扩增出ALV‑K囊膜蛋白基因；所述引物2为：ALV‑K‑env‑F： GCCCTCTCTTTGCAGGCATTTCTGACTGGATATCCTG；ALV‑K‑env‑R：CGCGTTCGGAACCTACACTGTTCCATTTTCGGGCTG。3）利用重组酶ExnaseTM II对步骤1）和2）得到的PCR产物进行快速重组克隆；阳性克隆转染DF‑1细胞拯救出表达ALV‑K囊膜蛋白的重组病毒。