[发明专利]新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法在审
| 申请号： | 201811213618.0 | 申请日： | 2018-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN109432414A | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 刘华栋;陆冰洋;李婷婷;丁树荣;王彩先;李志春;唐娟;詹丽娥 | 申请（专利权）人： | 山西省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | A61K39/17 | 分类号： | A61K39/17;A61P31/14;C12N7/00 |
| 代理公司： | 太原科卫专利事务所(普通合伙) 14100 | 代理人： | 朱源;武建云 |
| 地址： | 030032 山西*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法，包括如下步骤：（1）、采集发病鸡场病死鸡的内脏器官，置于‑20℃冰箱冷冻，冻硬后取出融化，待完全融化后再次冷冻，如此反复循环3次；（2）、取1g组织混合物置于无菌研钵中研磨，加入1000mL的生理盐水，研磨至匀浆状后8000rpm离心，取上清液；（3）、将上清液使用PCR方法鉴定，确定为新城疫病毒；（4）、将上清液使用0.22μm的滤膜过滤后，分别接种于营养琼脂和鲜血琼脂检测其是否含有细菌。将免疫液接种于孵化至12日龄的受精蛋中，这样孵化出的鸡就具有更高的抗体水平，提升其对新城疫病毒的免疫力。 | ||
| 搜索关键词： | 免疫液 新城疫病毒 鸡胚接种 研磨 上清液 新城疫 制备 接种 融化 孵化 冰箱冷冻 反复循环 方法鉴定 抗体水平 滤膜过滤 内脏器官 取上清液 生理盐水 营养琼脂 混合物 受精蛋 匀浆状 病死 琼脂 日龄 无菌 研钵 免疫力 冷冻 取出 细菌 采集 检测 | ||
【主权项】：
1.一种新城疫鸡胚接种免疫液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）、采集发病鸡场病死鸡的内脏器官，置于‑20℃冰箱冷冻，冻硬后取出融化，待完全融化后再次冷冻，如此反复循环3次；（2）、 取1g组织混合物置于无菌研钵中研磨，加入1000mL的生理盐水，研磨至匀浆状后8000rpm离心，取上清液；（3）、将上清液使用PCR方法鉴定，确定为新城疫病毒；（4）、将上清液使用0.22μm的滤膜过滤后，分别接种于营养琼脂和鲜血琼脂检测其是否含有细菌；（5）、取无菌的上清液注射于10日龄的SPF鸡胚尿囊腔中，于37℃孵化器内孵化；（6）、将在孵化器中培养120h未死亡的鸡胚取出，用灭菌注射器吸出尿囊液，通过血凝试验检测尿囊液中的含毒量；当病毒效价低于24时，则需要使用透析袋对尿囊液进行浓缩；当病毒效价高于24时，使用灭菌生理盐水对其进行稀释；将病毒效价为24的病毒尿囊液吸入灭菌容器里，‑20℃冻存备用；（7）、将病毒效价调至为24的尿囊液接种于1日龄SPF鸡脑内，观察8日内的发病和死亡情况，如没有发病和死亡，或在最后一天内出现个别发病和死亡，则尿囊液符合要求，否则弃去；（8）、将病毒效价为24的尿囊液进行稀释，将尿囊液病毒效价稀释为22时尿囊液即为免疫液，置于‑20℃保存，备用。
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