[发明专利]一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法有效
| 申请号： | 201811223520.3 | 申请日： | 2018-10-19 |
| 公开（公告）号： | CN109321643B | 公开（公告）日： | 2022-01-28 |
| 发明（设计）人： | 孙达权;石静;周莉莉;张欣;胡桐;张钦真 | 申请（专利权）人： | 贵州医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 胡绪东 |
| 地址： | 550025 贵州省*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法，该方法为：首先在PCR反应体系中加入各反应组分与高保真Taq DNA polymerase，然后按如下反应程序进行PCR扩增：(1)95℃预变性2min；(2)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；28循环；(3)在反应的PCR管中直接加入普通Taq DNA聚合酶并混匀；(4)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；3循环；(5)72℃，10min。本发明在利用高保真Taq DNA polymerase进行PCR反应的最后3个循环中加入普通Taq DNA polymerase，PCR完成后即可获得具有高保真性的3'末端加“A”的PCR产物，克服了当前高保真PCR过程中无法在产物3'末端直接加“A”的问题，省略了以前需要对高保真PCR产物纯化后再用加“A”的过程，简化了高保真PCR产物TA克隆前的处理步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 获得 高保真 末端 产物 pcr | ||
【主权项】：
1.一种获得高保真且3’末端加“A”产物的PCR法，其特征在于：该方法为：首先在PCR反应体系中加入PCR缓冲液、dNTP、上游引物和下游引物、模板和高保真Taq DNApolymerase，然后按如下反应程序进行PCR扩增：(1)95℃预变性2min；(2)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；28循环；(3)在反应的PCR管中直接加入普通Taq DNA聚合酶并混匀；(4)95℃，15sec；退火温度，30sec；72℃，延伸时间；3循环；(5)72℃，10min。
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