[发明专利]一种检测生物素含量、叶酸含量和维生素B12含量的方法

摘要

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种检测生物素含量、叶酸含量和维生素B₁₂含量的方法，包括步骤一、提取样品的清液；步骤二、稀释标准品和样品清液；步骤三、培养稀释后的标准品和样品清液；步骤四、制定标准品的标准曲线和检测样品；该方法能同时提取生物素、叶酸和维生素B₁₂，从而提高了生物素、叶酸和维生素B₁₂的检测效率，具有易于操作和检测灵敏度高的优点。

主权项

1.一种检测生物素含量、叶酸含量和维生素B12含量的方法，其特征是：包括以下步骤：步骤一、提取样品的清液(1)称取样品至离心管中，先向离心管加入预热的磷酸钾缓冲溶液，使样品充分溶解，再加入磷酸钾缓冲溶液，使得样品与磷酸钾缓冲溶液的重量之比是1：35～45；(2)将上述(1)的离心管沸水浴处理，沸水浴时震荡所述离心管，沸水浴时间为25～40min，得到样品与磷酸钾缓冲溶液混合液；(3)将上述(2)的离心管冰水浴处理，使样品与磷酸钾缓冲溶液混合液冷却至3～5℃；(4)采用离心机并将其冷却至3～5℃，然后把上述(3)中冷却后的离心管置入所述离心机进行离心处理，得到上层脂肪、中层清液和下层沉淀；步骤二、稀释(1)稀释样品清液：量取三份清液，该三份清液分别是测定生物素的清液、测定叶酸的清液和测定维生素B12的清液，然后分别稀释该三份清液，得到三份样品稀释液，该三份样品稀释液的含量对应在生物素标准曲线范围内、在叶酸标准曲线范围内及维生素B12标准曲线范围内，且稀释后的清液容积不少于500μL；(2)稀释标准品：分别采用生物素标准品、叶酸标准品和维生素B12标准品并将其分别稀释为不同含量步骤三、培养(1)将步骤二所得的三个稀释后的清液和三个稀释后的标准品分别加入包埋有特定测试菌种的微孔板中，且分别加入相应的培养基，其中，每个微孔板中的培养基与稀释后的液体的重量之比是0.8～1.5：1；(2)在微孔板上黏上薄膜，然后把微孔板置于带盖的铝盒内，所述铝盒的底部铺盖了用无菌水浸湿的无菌纱布，所述微孔板通过支架从而架设在所述无菌纱布上；(3)把上述装有微孔板的铝盒放在30～40℃中培养46～50h；步骤四、测定(1)标准曲线a、将步骤三培养后的微孔板上的薄膜压实，然后上下颠倒震摇微孔板，使微孔板底部的细菌均布在培养基中，形成菌悬液；b、使用酶标仪分别测量稀释后的不同含量的生物素标准品、叶酸标准品和维生素B12标准品的OD值，分别以标准品的不同含量为横坐标，以标准品的不同含量所对应的OD值为纵坐标，制作4次多项式回归曲线，分别得到生物素标准曲线、叶酸标准曲线和维生素B12标准曲线；(2)样品a、将步骤四培养后的微孔板上的薄膜压实，然后上下颠倒震摇微孔板，使微孔板底部的细菌均布在培养基中，形成菌悬液；b、采用酶标仪分别测定供生物素、叶酸和维生素B12检测用样品微孔所对应的菌悬液的OD值，将所测得的OD值代入所对应的标准曲线的4次多项式，并乘以相应的稀释度计算出生物素、叶酸和维生素B12三者的含量。