[发明专利]一种卤醇脱卤酶突变体及其应用在审
| 申请号： | 201811254973.2 | 申请日： | 2018-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109295044A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 吴坚平;王露;徐刚;杨立荣 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自军 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种卤醇脱卤酶突变体及其应用，该突变体为下列中的一种或多种；第84位精氨酸替换为丙氨酸、丝氨酸、组氨酸或天冬酰胺；第88位精氨酸替换为亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸或异亮氨酸；第136位缬氨酸替换为苏氨酸或丝氨酸；第144位天冬酰胺替换为半胱氨酸、组氨酸或苏氨酸。本发明分别利用定向进化和半理性设计方法对卤醇脱卤酶HheAAM进行改造，发现84位、88位、136位、144位影响酶活；利用迭代饱和突变策略对4个关键位点进行组合突变，以及组合活性位点饱和实验策略对4个关键位点进行随机组合突变，筛选得到最优突变体的比酶活为801.59U·g‑1，是原始酶的12倍。 | ||
| 搜索关键词： | 替换 苏氨酸 卤醇脱卤酶突变体 半胱氨酸 天冬酰胺 精氨酸 丝氨酸 突变体 组氨酸 缬氨酸 酶活 位点 突变 饱和 卤醇脱卤酶 苯丙氨酸 定向进化 活性位点 理性设计 实验策略 随机组合 突变策略 异亮氨酸 丙氨酸 亮氨酸 原始酶 迭代 应用 筛选 改造 发现 | ||
【主权项】：
1.一种卤醇脱卤酶突变体，其特征在于，所述卤醇脱卤酶突变体为下列(1)～(4)中的一种或两种以上的组合；(1)将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第84位的精氨酸替换为丙氨酸、丝氨酸、组氨酸或天冬酰胺；；(2)将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第88位的精氨酸替换为亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸或异亮氨酸；(3)将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第136位的缬氨酸替换为苏氨酸或丝氨酸；(4)将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第144位的天冬酰胺替换为半胱氨酸、组氨酸或苏氨酸。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811254973.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
