[发明专利]银杏内生真菌的分离筛选方法在审
| 申请号： | 201811289627.8 | 申请日： | 2018-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN109182151A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 宋育刚 | 申请（专利权）人： | 贵州四季硕果农业开发有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;A01P3/00 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 刘楠 |
| 地址： | 550399 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种银杏内生真菌的分离筛选方法，采集银杏根、茎、叶、果肉、果仁；将银杏组织经表面消毒后，培养，从中选出表面无任何菌种生长的组织；将无菌组织在无菌条件下切割成小片移植于PDA培养基上，置28℃恒温箱培养，至样品周围长出菌丝时，挑取形态不同的菌落，经纯化后转接到PDA斜面培养基备用；将液体发酵培养基分装在三角瓶中，用接种钩挑取少许分离纯化的内生真菌菌丝于培养瓶中培养，取发酵上清液；取上清液与冷却至50℃的PDA培养基于无菌培养皿内，放供试菌饼，计算各菌株发酵液对供试病原菌的抑制率；筛选出的高效抑制率内生真菌菌株进行保藏备用。 | ||
| 搜索关键词： | 内生真菌 银杏 菌丝 分离筛选 备用 病原菌 液体发酵培养基 果仁 内生真菌菌株 发酵上清液 恒温箱培养 菌株发酵液 切割成小片 无菌培养皿 保藏 表面消毒 分离纯化 高效抑制 菌种生长 取上清液 无菌条件 无菌组织 果肉 接种钩 培养瓶 三角瓶 抑制率 银杏根 菌落 分装 菌饼 冷却 采集 筛选 移植 | ||
【主权项】：
1.一种银杏内生真菌的分离筛选方法，其特征是包括以下步骤：(1)采集银杏根、茎、叶、果肉、果仁；(2)将步骤(1)银杏组织经表面消毒后，直接种植于PDA培养基平皿上，置26℃～28℃恒温箱培养，从中选出表面无任何菌种生长的组织；(3)将步骤(2)的无菌组织在无菌条件下切割成小片移植于PDA培养基上，置28℃恒温箱培养，至样品周围长出菌丝时，采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌落，经纯化后转接到PDA斜面培养基备用；(4)其各组分与每升所含的质量为蛋白胨0‑5.5g、玉米粉1‑8g、麸皮0‑10g、可溶性淀粉0‑10g、葡萄糖1‑8g、黄豆饼粉1‑9g、CaCO30.5‑2.5g、NH4NO30.1‑1.2g、MgSO40.1‑0.9g、KH2PO40.1‑0.9g；(5)将步骤(4)液体发酵培养基分装在三角瓶中，用接种钩挑取少许经步骤(3)分离纯化的内生真菌菌丝于培养瓶中，置28℃摇床，200r/min，振荡培养4天，发酵液经5000r/min离心10min，取发酵上清液；(6)取步骤(5)各上清液与冷却至50℃的PDA培养基按毫升体积1∶9混匀于无菌培养皿内，凝固后在每个培养基平面放1个直径为4mm的供试菌饼，置28℃培养箱培养后，计算各菌株发酵液对供试病原菌的抑制率；(7)将步骤(6)筛选出的高效抑制率内生真菌菌株进行保藏，备用。
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