[发明专利]一种高速逆流色谱制备伏马毒素B1

摘要

本发明涉及一种高速逆流色谱制备伏马毒素B1标准品的方法，属于农产品安全检测技术领域；该方法包括样品提取、反相柱层析粗纯化、高速逆流色谱精制；本发明高速逆流色谱制备伏马毒素B1标准品的方法稳定，能够适用于大米、小麦等多种谷物基质中伏马毒素B1的制备，制备量大、回收率高、成本低廉，能单次制备250mg以上纯度大于95%的伏马毒素B1标准品,单次成本仅为500元左右。

主权项

1.一种高速逆流色谱制备伏马毒素B1标准品的方法，其特征在于，具体步骤如下：1）制备伏马毒素培养物：将镰刀菌接种至大米培养基中，25℃培养15d‑40 d，即获得大米培养物，将大米培养物晾干、粉碎，获得伏马毒素培养物，备用；大米培养基: 将大米和水按照质量体积比10:3混合后，质量体积比单位为g/mL ，121℃灭菌1h；2）制备含有伏马毒素的大米基质：向步骤1）获得的伏马毒素培养物中加入乙酸乙酯，震荡萃取后，分层，弃上层有机相，将下层的固体物质吹干，即为含有伏马毒素的大米基质；3）制备第一次提取液：向步骤2）获得的含有伏马毒素的大米基质中加入甲醇‑水溶液震荡提取伏马毒素，震荡萃取后过滤，过滤后获得滤液和滤饼，备用，滤液即为第一次提取液；4）制备第二次提取液：取步骤3）获得的滤饼加入甲醇‑水溶液重悬，震荡萃取后过滤，滤液即为第二次提取液；5）上样：将步骤3）和步骤4）获得的第一次提取液和第二次提取液合并，减压蒸馏至干，加入C18层析柱，用甲醇‑水溶液冲洗杂质，然后用甲醇‑水溶液洗脱伏马毒素B1，分管收集洗脱液；6）分离纯化：用TLC法检测步骤5）每管洗脱液中是否含有伏马毒素，展开剂体系为氯仿、甲醇、冰醋酸按体积比依次为8:3:1混合后获得；将含有伏马毒素B1的洗脱液减压蒸馏至干后，用高速逆流色谱体系的流动相重溶；再使用高速逆流色谱对伏马毒素B1分离纯化，分管收集洗脱液，用TLC方法检测每管洗脱液中是否含有伏马毒素B1，将含有伏马毒素B1的洗脱液合并后减压蒸馏至干，即获得伏马毒素B1标准品。