[发明专利]一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法

摘要

本发明公开了一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，包括以下步骤：外植体启动培养阶段——丛芽培养阶段——壮苗培养挑选阶段——生根成苗培育阶段，植体启动培养阶段，先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，本发明中杂交兰十八格格茎尖组织培养装置有益效果，通过培养基配方和接种时间的控制，减少褐化现象，更实用，利用组织培养技术由杂交兰茎尖长芽，再以芽繁芽的方式，减少变异，从而可得到大量性状一致的种苗，是商业化生产杂交兰的最佳途径。

主权项

1.一种杂交兰十八格格的茎尖组织培养方法，其特征在于，包括以下四个培育步骤：步骤一：外植体启动培养阶段：先取在大棚洁净环境中生长的杂交兰十八格格干净植株的嫩芽，先用蒸馏水初次冲洗干净的植株的嫩芽，嫩芽选取时，一个星期内不要对植株进行浇水、施肥、打药等，然后用锋利的刀片切下未张开芽口的嫩芽，用流动的水缓慢冲洗植株嫩芽，然后用软毛牙刷轻轻的刷洗嫩芽，刷洗后的嫩芽可自然阴干后，放在75％的酒精中浸泡，摇动30秒，用10倍的漂白水，(漂白水中需要添加一滴洗洁精为展着剂)处理10分钟，无菌水冲洗3‑4次，然后用无菌解剖刀剥掉外围叶片，然后用0.1％氯化汞溶液(加一滴洗洁精为展着剂)浸泡并摇动10‑15分钟，用无菌水冲洗3‑4次，然后可将处理后的嫩芽放置到带有筛孔的过滤板上，然后在过滤板上端加设风机，利用风力加速嫩芽水分水分晾干，用无菌解剖刀剥掉叶片，茎尖切成0.6‑1CM高度，每瓶培养基接种一个茎尖，避免交叉污染，将消毒后的茎尖接种到启动培养基：美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L上，暗培养一周，然后使用一支日光灯光照培养，每天光照12小时，经过3个月的培养，外植体启动成功率达到60％，一个茎尖上有1‑2个小芽长出来，并且有根长出来。步骤二：丛芽培养阶段，先将茎尖诱导的小芽切去叶子和根，然后转接至培养基：Murashige和Skoog 1962+萘乙酸0.1‑5mg/L+6‑苄氨基腺嘌呤1‑5mg/L+激动素1‑5mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L，1支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月，一个芽上长出3‑4个芽，成丛生状，培养基有褐化现象，需要及时转接。步骤三：壮苗培养挑选阶段：将诱导的丛芽，3‑4芽为一丛，芽球、差的小芽用无菌解剖刀剔除不要，然后将丛芽接种到壮苗培养基，壮苗培养基配方为，美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L上，然后采用两个日光灯培养，每天光照12小时，温度控制在25±2℃，培养2个月，此时丛芽生产成苗，苗大部分长到3CM以上，有的苗上有根长出。步骤四：生根成苗阶段，取3cm以上的小苗接种到美国花宝1号+马铃薯汁5000‑15000mg/L+香蕉汁5000‑15000mg/L+活性炭1g/L的培养基上，2支灯培养，每天光照12小时，温度25±2℃，培养3个月后，苗高10CM，一株苗有5‑6条根，根长5CM以上，生根率达到100％。