[发明专利]一种尿苷二磷酸葡萄糖及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的生物合成方法有效
| 申请号： | 201811338833.3 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109371079B | 公开（公告）日： | 2019-09-06 |
| 发明（设计）人： | 生举正;徐以泓;孟丹华 | 申请（专利权）人： | 安徽禾庚生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/30 | 分类号： | C12P19/30;C12R1/19 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 陈桂玲 |
| 地址： | 239001 安徽省滁州市琅*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种尿苷二磷酸葡萄糖及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的生物合成方法。本发明以可溶淀粉为主要初始原料，将高温α‑葡聚糖磷酸化酶和高温糖‑1‑磷酸核苷酸化酶分别在大肠杆菌中重组表达，利用表达后的菌体高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖。在此基础上，将高温尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶在大肠杆菌中重组表达，偶联上述尿苷二磷酸葡萄糖的合成体系高温全细胞催化合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸，同时在尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的合成体系中引入高温NADH氧化酶的全细胞催化体系，构成高温NAD+/NADH循环系统，以减少辅酶NAD+的使用。本发明利用高温全细胞催化的方式，成功避免合成过程中菌体各种代谢通路的干扰，减少纯化难度。 | ||
| 搜索关键词： | 尿苷二磷酸葡萄糖 全细胞催化 大肠杆菌 磷酸葡萄糖 合成体系 生物合成 重组表达 合成尿 菌体 葡聚糖磷酸化酶 初始原料 代谢通路 合成过程 循环系统 辅酶NAD 核苷酸 脱氢酶 磷酸 淀粉 可溶 偶联 引入 成功 | ||
【主权项】：
1.一种尿苷二磷酸葡萄糖的生物合成方法，其特征在于，步骤如下：(1)在反应液中，以可溶性淀粉和磷酸盐为底物，以含有诱导表达好高温α‑葡聚糖磷酸化酶的重组大肠杆菌为催化剂，生物合成得到1‑磷酸‑葡萄糖；(2)取步骤(1)得到的1‑磷酸‑葡萄糖，加入镁离子、磷酸二氢钠缓冲液、尿苷三磷酸，以含有诱导表达好高温糖‑1‑磷酸核苷酸化酶的重组大肠杆菌为催化剂，生物合成得到尿苷二磷酸葡萄糖。
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