[发明专利]HPLC-DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度

摘要

本发明涉及精神病类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及HPLC‑DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度。本发明提供了测定服用喹硫平药物后血清中喹硫平浓度的方法，所述方法包括人血清样本预处理步骤和高效液相色谱(HPLC‑DAD)分析步骤。本发明建立了专属性强、灵敏度高和重现性好的HPLC‑DAD方法。本发明首次建立的测定喹硫平血药浓度的方法在准确度、精密度、专属性、稳定性等方面的验证结果均符合2015年版中华人民共和国药典相关指导原则(9012)对生物样品的分析要求。

主权项

1.HPLC‑DAD法测定人血清中喹硫平药物浓度，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准工作液的配制(1)标准工作液的配制：精确称取富马酸喹硫平标准品5.57mg于15mL离心管中，用甲醇溶解，配成喹硫平浓度为1.0mg/mL的储备液S1，将标准储备液S1用甲醇进行稀释，分别在含有1.0‑60μg/mL喹硫平的范围内配制系列标准工作液，于‑80℃冰箱冷冻保存；(2)内标工作液的配制精密称取染料木素标准品2.31mg于5mL离心管中，用甲醇溶解，配成浓度为1.0mg/mL的储备液ISS1，将标准储备液ISS1用甲醇进行稀释，得到浓度为10μg/mL的内标工作液，于‑80℃冰箱冷冻保存；(二)血清样本的制备(3)取空白血液至少5mL，在离心速度3500rpm下离心10min，取上清液得空白血清，将步骤(1)中所述的系列标准工作液10μL分别和上述步骤中的空白血清190μL混合制成的喹硫平药物浓度为50‑3000ng/mL的标准工作血清；(4)取待测血液至少5mL，在离心速度3500rpm下离心10min，取上清液得待测血清，上述血清置于‑20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)血清样品处理(5)用移液枪移取10μL步骤(2)中所述内标工作液于1.5mL离心管中，然后加入200μL步骤(二)中所述血清，在2000rpm的转速下涡旋混合3min；(6)用移液枪移取800μL含有0％‑30％正己烷的甲基叔丁基醚萃取剂加入步骤(5)的离心管中，在2000rpm的转速下涡旋混合3min，以达到充分萃取的目的，然后在14000rpm的转速下高速离心5min，得到上清液；(7)取步骤(6)中所述的上清液750μL置于另一只1.5mL离心管中，常温下用氮气缓慢吹干；(8)用移液枪移取100μL含有45％乙腈的水复溶液加入步骤(7)中所述的吹干的离心管中，在2000rpm的转速下涡旋混合3min，然后在14000rpm的转速下高速离心5min，得到上清液即为待测样本；(四)标准曲线方程将步骤(3)中所述的血清按照步骤(三)预处理后使用液相色谱仪和DAD检测器对待测样本进行检测，得出上述待测样本的喹硫平和内标色谱图，在上述喹硫平和内标色谱图中得到待测目标物峰面积与内标物峰面积，将待测目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，将步骤(3)中标准工作血清中待测目标物药物浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测数据通过加权最小二乘法进行线性回归，得到标准曲线方程为y＝ax+b，并得出权重系数a和b；(五)未知样本的检测将步骤(4)中所述的待测血清按照步骤(三)预处理后使用液相色谱仪和DAD检测器对待测样本进行检测，得出上述待测样本的喹硫平和内标色谱图，在上述喹硫平和内标色谱图中得到待测目标物峰面积与内标物峰面积，将待测目标物峰面积与内标物峰面积的比值y代入上述步骤(四)中的标准曲线方程中，通过计算得到待测样本中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待测血清中的喹硫平药物浓度。