[发明专利]一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法

摘要

本发明公开了一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，步骤一、准备所需药剂：HEPES溶液、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液、氢氧化钠溶液、脂蛋白磷脂酶A2校准液和蒸馏水备用，以及若干份血样，步骤二、HEPES缓冲液调配：称取238.3gHEPES溶液溶解在800ml蒸馏水中，加入1‑2M氢氧化钠水溶液调节至所需pH值，取用蒸馏水定容至1000mL，用带有瓶塞的烧瓶在4摄氏度存放备用，涉及酶法检测技术领域。该酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，通过取用上层悬浮液、中层悬浮液和下层悬浮液进行三种液位的测量，相比于常规实验只取用上层悬浮液，测定的范围更广，可避免因为上层悬浮液测定物含量过少，导致测量不准确的问题。

主权项

1.一种酶法检测脂蛋白相关磷脂酶A2的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：步骤一、准备所需药剂：HEPES溶液、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液、氢氧化钠溶液、脂蛋白磷脂酶A2校准液和蒸馏水备用，以及若干份血样。步骤二、HEPES缓冲液调配：称取238.3gHEPES溶液溶解在800ml蒸馏水中，加入1‑2M氢氧化钠水溶液调节至所需pH值，取用蒸馏水定容至1000mL，用带有瓶塞的烧瓶在4摄氏度存放备用。步骤三、血样配置，选取2mL血样，添加8mL蒸馏水，利用蒸馏水使细胞破裂，然后静置15分钟，使血样分层，分别取上层、中层和下层的悬浮液与三只试管中，贴标签备用，且三支试管样品均为1.1mL。步骤四、脂蛋白磷脂酶A2测定：三种血样试剂均取用1mL、1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液100mL和HEPES缓冲液25mL，将1‑豆蔻酰基‑2‑(4‑对硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰胆碱溶液与血样混合，置于漩涡振荡器上搅拌均匀，水浴5min，然后向样品中加入HEPES缓冲液，再次使用漩涡振荡器上混合均匀，然后加入脂蛋白磷脂酶A2校准液，调节pH值至7，将混合后的溶液放在恒温箱内恒温反应2min。步骤五、光谱分析：恒温反应结束后，用光谱仪对反应后的溶液进行光谱分析，读取其初始吸光度，然后连续监测4分钟，将溶液的吸光度变化列表，分析脂蛋白内磷脂酶A2的活性和浓度。