[发明专利]基于微流控微珠阵列芯片循环核酸检测试剂盒及应用方法

摘要

本发明属于生物分子检测技术领域，公开了一种基于微流控微珠阵列芯片循环核酸检测试剂盒及应用方法，基于微流控微珠阵列芯片循环核酸检测试剂盒，包括有：捕获探针功能化微球的微流控检测芯片；四条LAMP引物及LAMP扩增试剂；LAMP基础结构环化试剂及环化辅助探针；滚环扩增试剂；信号探针修饰的石墨烯量子点。本发明的方法操作简单、灵敏度极高，可通过血液中EB病毒的检测实现鼻咽癌的早期诊断。本发明首次将微流控动态微阵列芯片的微量及高灵敏检测特性、高灵敏目标物多重信号扩增(包含环介导等温扩增和滚环放大)及功能化石墨烯量子点荧光信号放大整合起来，可以检测到10amol/L的EB病毒DNA。

主权项

1.一种基于微流控微珠阵列芯片循环核酸检测试剂盒，其特征在于，所述基于微流控微珠阵列芯片循环核酸检测试剂盒，包括：包被有捕获探针功能化微球的微流控检测芯片；捕获探针序列SEQ ID NO：1；设计的四条LAMP引物及LAMP扩增试剂，以EB病毒DNA为模版通过环介导等温扩增获得LAMP基础结构序列；四条LAMP引物序列分别为：F3 SEQ ID NO：4；B3 SEQ ID NO：5、FIP SEQ ID NO：6、BIP SEQ ID NO：7；LAMP基础结构序列为SEQ ID NO：8；LAMP基础结构环化试剂及环化辅助探针利用T4多聚核苷酸激酶对LAMP基础结构的5’端磷酸化，在环化辅助探针帮助下利用高温连接酶将LAMP基础结构序列环化；环化辅助探针序列为：SEQ ID NO：2；滚环扩增试剂，微球表面捕获探针捕获环化的LAMP基础结构，以环形基础结构为模版通过滚环扩增形成长链的扩增序列；扩增序列为SEQ ID NO：9；信号探针修饰的石墨烯量子点，能与滚环扩增产物特异性杂交，产生荧光信号；信号探针序列为：SEQ ID NO：3。