[发明专利]一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法在审
| 申请号： | 201811346921.8 | 申请日： | 2018-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN109321536A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 徐国云;翟妞;周会娜;张慧;陈千思;刘萍萍;郑庆霞;许亚龙;王晨;李晶 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N9/08 |
| 代理公司： | 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104 | 代理人： | 时立新 |
| 地址： | 450001 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本申请属于烟草代谢物技术领域，具体涉及一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法专利申请事宜。该方法针对新鲜烟叶中氧化酶的提取，具体包括：制备提取液（采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS）、烟叶预处理、溶液法提取等步骤。初步测定结果表明，提取液中SOD酶活得到了较好提高，可达3.7U/μg全蛋白，POD酶活可达6.3×10‑3U/μg全蛋白，而COX酶活可达5.1×10‑3U/μg全蛋白，较好达到了减少杂质蛋白干扰、提升氧化酶含量的目的。同时由于相关提取方法简单快速、耗时较短（仅1.5 h左右），因此使得本申请具有较好的科研价值，可为相关酶活性分析及其它相关蛋白分析和研究奠定技术基础。 | ||
| 搜索关键词： | 氧化酶 全蛋白 酶活 烟叶提取物 提取液 申请 酶活性分析 烟叶预处理 蛋白分析 技术基础 新鲜烟叶 杂质蛋白 代谢物 缓冲液 裂解液 溶液法 制备 耗时 烟草 科研 研究 | ||
【主权项】：
1.一种提高烟叶提取物中氧化酶酶活的提取方法，其特征在于，该方法针对新鲜烟叶中氧化酶的提取，具体包括如下步骤：（1）制备提取液，具体采用裂解液RIPA、缓冲液NEB或PBS；配方组成为：裂解液RIPA ：pH 8.0的Tris‑Cl、50 mM，EDTA、1mM，SDS、0.1%，NaCl、150 mM，NP‑40、1%，PMSF、1 mM；缓冲液NEB： pH 7.5的Hepes、20mM，KCl、40 mM，EDTA、1 mM，PMSF、1 mM；（2）烟叶预处理将栽培烟草8‑12叶期的新鲜烟叶研磨粉碎；（3）溶液法提取在步骤（2）研磨成粉烟叶样品中加入步骤（1）中制备的提取液，震荡混匀后，冰上静置不少于1h；具体用量方面，研磨成粉烟叶样品100mg，提取液用量为500μl~1mL；静置完成后，5000~15000rpm离心不少于20min，保留上清液，即为氧化酶的提取液。
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