[发明专利]一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法

摘要

本发明公开了一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法，其特征在于，包括血液预处理步骤和基因组DNA提取步骤。本发明的有益效果在于：本方法主要用于从人或哺乳动物血液中提取基因组DNA，抽提出的DNA可直接用于PCR、酶切等分子生物学相关实验。本发明的方法针对性强，操作方便简洁，通量高，且硅胶柱回收基因组DNA效率高、纯度高。

主权项

1.一种批量板式硅胶吸附柱提取血液基因组DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)转移500uL～1000uL全血样品至2.2cm 96孔深孔板中，再用排枪加入700uL TRX溶液；2)用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s；3)震荡结束后称重配平，于板式离心机5000～6000RCF，2min，轻轻倒掉废液，吸水纸纸上倒扣放置30s，若沉淀仍显明显红色则需再进行步骤4、5，若无直接进行步骤6；4)再加入700uL TRX溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s；5)于板式离心机5000～6000RCF，2min，轻轻倒掉废液，吸水纸上倒扣放置一会，若红细胞残留过多再重复一次步骤3；6)加入200uL 1x TE溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧，上面再垫一层薄的橡胶皮垫，上匀浆机：25HZ，100s，结束后于板式离心机中快甩至400RCF；基因组DNA提取步骤：1)加入200uL CCF溶液和20μl蛋白酶K(Proteinase K)，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧摇匀，55℃水浴锅中孵化10～40min；2)加入300uL PR溶液和300uL BA溶液，用96孔硅胶皮垫按对应孔号压紧充分摇匀，注意不要倒置摇晃，于板式离心机5000～6000RCF，5min；3)转移上清液，用1000uL排枪调650uL吸取上清溶液于96孔板式柱子中，于板式离心机中3500RCF，1min，弃废液；4)用排枪加入500uL漂洗液，于板式离心机5000RCF，1min，弃废液；5)重复步骤5；6)用排枪加入500uL 80％乙醇，于板式离心机5000RCF，1min，弃废液；7)于板式离心机5300RCF，空甩5min，以尽可能除去残留的乙醇；8)置37℃烘箱中烘15min，以除尽残留的乙醇；9)用排枪在柱中央悬空加入70μl洗脱液，于板式离心机5000RCF，1min；10)用排枪在柱中央悬空加入50μl洗脱液，于板式离心机5000RCF，2min；11)结束后电泳及测核酸浓度，然后置‑20℃冰箱保存后待测。