[发明专利]一种制备牙髓干细胞的方法在审
| 申请号： | 201811379567.9 | 申请日： | 2018-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN109321522A | 公开（公告）日： | 2019-02-12 |
| 发明（设计）人： | 杨致亭;任婧婧;尚永明;王好玉;韩伟;潘德芹 | 申请（专利权）人： | 潍坊市康华生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 潍坊中润泰专利代理事务所(普通合伙) 37266 | 代理人： | 李光林 |
| 地址： | 261023 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种制备牙髓干细胞的方法，包括以下步骤：S1、牙齿的采集；S2、分离牙髓干细胞，固定住牙齿，劈开牙冠，取出牙髓，将取出的牙髓放入PBS中冲洗，然后将取出的牙髓制成1‑3mm3的块状，加入0.025%‑0.2%的Ⅰ型胶原酶和0.025%‑0.2%的中性蛋白酶的混合液，37℃消化10min‑30min，加入PBS，1000rpm‑1500rpm离心弃上清，沉淀加入培养基浸润，将组织块贴到细胞培养皿中，置CO2培养箱中培养。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：提供的消化贴壁法所用的酶为Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶的混合物，Ⅰ型胶原酶与中性蛋白酶的作用都比较温和，既可以降低周围组织对干细胞的禁锢，又不会对细胞造成损伤，即保证了分离干细胞的纯度，又缩短了收获细胞所需的时间。 | ||
| 搜索关键词： | 牙髓干细胞 中性蛋白酶 胶原酶 牙髓 取出 制备 牙齿 分离干细胞 细胞培养皿 细胞 消化 牙冠 周围组织 培养基 混合物 干细胞 混合液 组织块 放入 劈开 贴壁 冲洗 沉淀 浸润 损伤 采集 收获 保证 | ||
【主权项】：
1.一种制备牙髓干细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、牙齿的采集；S2、分离牙髓干细胞，固定住牙齿，劈开牙冠，取出牙髓，将取出的牙髓放入PBS中冲洗，然后将取出的牙髓制成1‑3mm3的块状，加入0.025%‑0.2%的Ⅰ型胶原酶和0.025%‑0.2%的中性蛋白酶的混合液，37℃消化10min‑30min，加入PBS，1000rpm‑1500rpm离心弃上清，沉淀加入培养基浸润，将组织块贴到细胞培养皿中，置CO2培养箱中培养。
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