[发明专利]一种排硫硫杆菌蛋白质双向电泳分析方法

摘要

本发明涉及一种排硫硫杆菌细胞蛋白的电泳分析方法，其具体步骤如下：A.排硫硫杆菌细胞蛋白的提取，B.SDS‑PAGE凝胶的制备，C.双向凝胶电泳，D.染色处理及图像扫描。本方法操作流程清晰简单，分析效果较好，能够较好分离辨别15‑110kDa范围内的菌体蛋白，并可通过后续质谱分析得到一些蛋白的具体信息。

主权项

1.一种排硫硫杆菌细胞蛋白的电泳分析方法，其具体步骤如下：A.排硫硫杆菌细胞蛋白的提取将冷冻保存的排硫硫杆菌培养物加入蛋白裂解液磁力搅拌得悬浮液，经超声破碎后的悬浮液，离心收集上清液，加入有机溶剂萃取，再离心得沉淀物，再加入水化液溶解，其中水化液中DTT浓度为15‑25mM，测定并控制蛋白浓度为10‑50μg/mL，提取的蛋白溶液样品冰箱保存备用；B.SDS‑PAGE凝胶的制备用单体贮存液、分离胶溶液、SDS溶液、APS溶液和TEMED溶液按比例混合，制备质量体积分数为0.075‑0.125g/ml SDS‑PAGE凝胶；C.双向凝胶电泳用步骤A提取的蛋白溶液将胶条水化；将水化后的胶条安装到电泳仪中，先在100‑200V条件下进行低压除盐，再调高电压至5000‑7000V，进行第一向等电聚焦电泳；再将胶条平衡；将平衡后的胶条转移至步骤B配制好的SDS‑PAGE凝胶的胶面上，进行第二向SDS‑PAGE电泳；D.染色处理及图像扫描电泳完成后，凝胶使用染色剂染色，再进行图像扫描，用计算机软件分析图像，获取详细的蛋白样品信息。