[发明专利]基于杂交兰转录组开发的EST-SSR标记引物及应用

摘要

本发明公开了杂交兰EST‑SSR引物，及其在杂交兰植物的种质资源遗传多样性分析、遗传图谱构建和标记辅助育种中的应用。本发明公开了9组引物对，以及杂交兰EST‑SSR引物的筛选方法，具体包括：获取目标杂交兰叶片的原始基因数据库、对原始基因数据库进行SSR位点搜索、Primer 5.0对目标序列进行PCR引物设计，并生成候选引物；对候选引物进行PCR扩增，选出初筛分PCR引物，最后筛选出杂交兰EST‑SSR引物。本发明提供的9对EST‑SSR标记引物来自于杂交兰叶片转录组序列，引物的多态性丰富、扩增稳定、扩增条带易于鉴定，是稳定存在的新标记，填补了杂交兰基于转录组开发SSR引物的空白。

主权项

1.杂交兰EST‑SSR引物，其特征在于，包括以下9组引物对，其核苷酸序列如下：F1：5'‑TGGCACTAGTCAACCGTCAG‑3'；SEQ ID NO.1；R1：5'‑GCCAGTTACTTTCCTTAGGCG‑3'；SEQ ID NO.2；F2：5'‑CCGAGCACTGAAACATGAGA‑3'；SEQ ID NO.3；R2：5'‑CACATGTGCTTGCTACCGAC‑3'；SEQ ID NO.4；F3：5'‑GGAAACTAGTGAACCAGACGG‑3'；SEQ ID NO.5；R3：5'‑CGCGATGCCATTTCTTATTC‑3'；SEQ ID NO.6；F4：5'‑CCCAGTGTTCTCCTGGTCAT‑3'；SEQ ID NO.7；R4：5'‑ATTCTCCGTACCGTCTGGTG‑3'；SEQ ID NO.8；F5：5'‑AGGCACATAGGAGAGCCTGA‑3'；SEQ ID NO.9；R5：5'‑CTGAGCAGGAACTTGAAGCC‑3'；SEQ ID NO.10；F6：5'‑CATCAACGCGGTGTATGAAC‑3'；SEQ ID NO.11；R6：5'‑CCGAGATTTGAGTGTCGGAT‑3'；SEQ ID NO.12；F7：5'‑CTTCATTCCCGGCTAAATCA‑3'；SEQ ID NO.13；R7：5'‑GAAACTTCGCTCAAAAACGC‑3'；SEQ ID NO.14；F8：5'‑GAATTGGAACAATGAACGCA‑3'；SEQ ID NO.15；R8：5'‑AAGCAGGTGTTTCCAGCACT‑3'；SEQ ID NO.16；F9：5'‑CGCGTTCATACTCCGATACA‑3'；SEQ ID NO.17；R9：5'‑TAATTTAGAAGGAGGCGGGG‑3'；SEQ ID NO.18。