[发明专利]一种基于秀丽线虫检测塑化剂多世代蓄积毒性的方法

摘要

本发明属于分析检测技术领域，特别涉及一种基于秀丽线虫检测塑化剂多世代蓄积毒性的方法，包括制备处于同一时期的秀丽线虫虫卵溶液进而获得幼虫溶液，制备大肠杆菌OP50菌液，浓度梯度进行染毒培养并计算塑化剂样品的LC50，在LC50的1/1000浓度的塑化剂样品浓度下分别获得P0代、F1代、F2代、F3代的寿命、体长、身体弯曲和头部摆动频率指标，评价塑化剂样品的世代蓄积毒性类别。本发明提供一种方便快捷、成本低廉、操作简单的用秀丽线虫测定邻苯二甲酸酯类塑化剂的跨世代蓄积毒性的方法，对模拟实际环境暴露情形下的毒性研究方法进行了补充和扩展。

主权项

1.一种基于秀丽线虫检测塑化剂多世代蓄积毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，培养秀丽线虫至产卵期，用磷酸钾缓冲液清洗并收集产卵期秀丽线虫，再用裂解液裂解秀丽线虫母体并收集对裂解液有抵抗能力的虫卵，用磷酸钾缓冲液清洗，加入磷酸钾缓冲液调整秀丽线虫虫卵浓度为10枚/μL，得处于同一时期的虫卵溶液；S2，将S1中的虫卵溶液培养12‑18h，使虫卵孵化但保持在L1幼虫时期，将L1幼虫培养至L4幼虫时期，用磷酸钾缓冲液清洗并调整L4幼虫浓度为19‑21条/100μL，得幼虫溶液；用磷酸钾缓冲液清洗并调整大肠杆菌OP50溶液在波长570nm时吸光度1.2‑1.4，得菌液；S3，设置不同的待检塑化剂样品浓度梯度，每个浓度塑化剂样品中依次加入S2中的幼虫溶液和菌液，20℃下染毒培养48h，4h/次记录虫体死亡数，计算塑化剂样品的LC50；其中，塑化剂样品：幼虫溶液：菌液的体积用量比为2:1:1；S4，配制LC50的1/1000浓度的塑化剂样品，加入S1中的虫卵溶液、S2中的菌液，20℃下染毒培养48h，记为P0代，然后分别测定P0代寿命、体长、身体弯曲和头部摆动频率指标；其中，塑化剂样品：虫卵溶液：菌液的体积用量比为2:1:1；S5，用磷酸钾缓冲液将S4中P0代清洗并收集，重复S1、S4并分别获得F1代、F2代、F3代的寿命、体长、身体弯曲和头部摆动频率指标；S6，如果F1代与P0代各指标差异中任一项有统计学意义，则塑化剂样品有明确的世代蓄积毒性；如果F1代与P0代各指标差异均无统计学意义，且F2代与P0代各指标差异中任一项有统计学意义，则塑化剂样品有中等的世代蓄积毒性；如果F1代与P0代、F2代与P0代各指标差异均无统计学意义，且F3代与P0代各指标差异中任一项有统计学意义，则塑化剂样品有轻度的世代蓄积毒性；如果F1代与P0代、F2代与P0代、F3代与P0代各指标差异均无统计学意义，则塑化剂样品无明确世代蓄积毒性。