[发明专利]一种从螺旋藻中同时分离纯化出藻蓝蛋白和多糖的方法

摘要

本发明提供了一种从螺旋藻中同时分离纯化藻蓝蛋白和多糖的方法，先将螺旋藻破壁并固液分离得到藻蓝蛋白与多糖的粗提液与藻渣；再将粗提液用超滤进行部分多糖与藻蓝蛋白的分离；将藻渣用热碱液溶解搅拌取上清得多糖粗提液；再将分离的藻蓝蛋白粗提液进行两步盐析，获得沉淀后用磷酸盐缓冲液溶解，通过Sephadex G‑25脱盐，最后进行聚丙烯酸酯柱层析以及羟基磷灰石柱层析，以获得了高纯度的藻蓝蛋白＞4.0和高得率的螺旋藻多糖＞4%。本发明以螺旋藻为原料，通过采用盐析联合柱层析分离纯化高纯度藻蓝蛋白和高得率螺旋藻多糖，充分利用了螺旋藻，提高了螺旋藻的附加值，并且省时省力，可以工业化大规模生产。

主权项

1.一种从螺旋藻中同时分离纯化藻蓝蛋白和多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，将螺旋藻进行破壁产生藻液，藻液进行固液分离，所得液体为藻蓝蛋白与第一部分多糖混合粗提液，所得固体作为提取纯化第二部分多糖使用；S2，将步骤S1中获得的液体进行超滤，透过液为第一部分多糖溶液；浓缩液中加入适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得上清液一；将步骤S1中获得的固体溶于水，调节pH至碱性，进行碱提破壁，再将其离心，获得上清液二，所得上清液二为第二部分多糖粗提液；S3，向步骤S2中的上清液一中加适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得沉淀；调节步骤S2中的上清液二的pH至酸性，静置后离心，获得上清液三；S4，将步骤S3中的沉淀用磷酸盐缓冲溶液溶解，并用去离子水作为脱盐流动相进行脱盐，脱盐后的溶液为藻蓝蛋白初纯化溶液；S5，将步骤S4的藻蓝蛋白初纯化溶液，过聚丙烯酸脂层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液的组分，检测各组分中藻蓝蛋白的纯度和浓度，将富含藻蓝蛋白的组分用磷酸盐缓冲液作为流动相进行脱盐，以获得藻蓝蛋白纯化溶液；S6，将步骤S3的上清液三，过聚丙烯酸脂层析柱，进行吸附杂蛋白，收集穿透峰，得第二部分多糖溶液；在将第二部分多糖溶液与步骤S2获得的第一部分多糖溶液合并，浓缩得多糖；S7，将步骤S5中获得的藻蓝蛋白纯化溶液过羟基磷灰石层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液组分，合并得高纯度藻蓝蛋白。