[发明专利]一种应用酵母表达系统表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种应用酵母表达系统表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的方法。所述方法包括：1)表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种的构建；2)采用摇瓶发酵或者发酵罐进行诱导培养；3)蛋白纯化。本发明提供了一种新的sST2重组蛋白表达和纯化方法，通过酵母表达系统表达sST2重组蛋白，利用发酵罐技术提高产量，并且证明酵母源sST2具有良好的生物学活性，稳定性良好，应用验证显示其可以作为sST2化学发光检测试剂盒校准品。此外，本发明还建立了一种全新的表达量检测方法，完成了诊断试剂盒的应用验证，解决了目前sST2规模化生产方面的多个难点，能够满足诊断试剂领域对sST2需求，为sST2规模化生产提供新思路。

主权项

1.一种应用酵母表达系统表达可溶性生长刺激表达基因2(sST2)蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种的构建人工合成编码sST2融合蛋白的DNA序列，合成时在其C端引入6个组氨酸标签，在N端和C端预留酶切位点，目的片段和载体经过双酶切后进行连接，构建含有可溶性生长刺激表达基因2的重组质粒；质粒先进行线性化，然后通过电转的方式转入酵母菌感受态中，构建得到表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种；2)将构建得到的表达可溶性生长刺激表达基因2蛋白的酵母菌种划线培养后，接种培养基，进行一级种子和二级种子的培养；将得到的二级种子接种于摇瓶或发酵罐中，继续诱导培养，获得发酵液；将发酵液转移至离心桶中，离心，收集上清；3)纯化对收集的上清进行纯化，得到纯化后的可溶性生长刺激表达基因2蛋白。