[发明专利]一种MSI检测方法在审
| 申请号： | 201811407854.6 | 申请日： | 2018-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN110305958A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 黄国英;章金涛;许芳;王文丽;赵倩伟;陈慧平;杨卫民 | 申请（专利权）人： | 郑州海普生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 450001 河南省郑州市*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种MSI检测方法，包括如下步骤：S1、分别提取同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA，并分别选取贝斯塔遗传标记：Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250这5个位点进行扩增引物标记荧光；S2、PCR扩增；S3、将步骤S2中得到的PCR扩增产物进行毛细管电泳。本发明采用多重PCR单管扩增，结合优化反应条件及进行标记荧光，提高分析质量和通量，节省试剂跟耗材，降低成本。 | ||
| 搜索关键词： | 标记荧光 优化反应条件 正常粘膜组织 毛细管电泳 扩增引物 遗传标记 肿瘤组织 多重PCR 检测 个位 单管 耗材 扩增 通量 分析 | ||
【主权项】：
1.一种MSI检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、分别提取同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA，并分别选取贝斯塔遗传标记：Bat26，Bat25，D5S346，D2S123和D17S250这5个位点进行扩增引物标记荧光；S2、分别对步骤S1中得到的同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA进行PCR扩增：S2.1、取离心管，加入12μl的DNA和0.5μl的DNA Polymerase震荡混匀，离心；S2.2、在装有PCR预混液的8联管中的前5个孔中分别加入2μl步骤S2.1中离心后的混合液；S2.3、盖紧管盖，震荡混匀，离心，进行PCR扩增；扩增条件为：1)95℃,3min；2)95℃,30秒，52℃,30秒，72℃,60秒；35个循环；3)72℃,10min；S3、分别对步骤S2中得到的同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA的PCR扩增产物在基因分析仪上按照如下过程进行毛细管电泳：分别步骤S2.3中得到的8联管的前五个孔中的PCR扩增产物各Iμl加入到新的离心管中，然后向所述新的离心管中加入0.5ul LIZ500和10ul HIDI，震荡混匀，离心，在基因分析仪上进行毛细管电泳，得到检测结果。
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